BODIPY TR methyl ester

BODIPY TR甲酯是一种亲脂性GFP反染剂。BODIPY TR甲酯染料容易渗透细胞膜并定位于膜内细胞器,但不强烈定位于质膜。BODIPY TR甲酯是一种优良的红色荧光活性染料(Ex=568 nm,Em=625 nm),可用于揭示细胞核的位置和形状、胚胎组织内细胞的形状以及整个胚胎内器官形成组织的结合区域[1]。

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指南(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。生命染色程序[1]：1.以5 mM储备溶液溶解于无水二甲基亚砜中。2.将DMSO储备溶液以1:50的比例稀释到用5 mM HEPES(pH 7.2)缓冲的胚胎培养基(ERM)中,制成含有2%DMSO的100µM BODIPY TR甲酯染料的最终标记溶液。储存于-20°C。3.胚胎在100µM BODIPY TR甲酯染料中染色1小时,然后在HEPES缓冲ERM中连续三次洗涤。4.胚胎安装在开放式腔室中进行成像。对于延时记录,将染色的胚胎去蛋黄并固定在盖玻片上。5.用于固定实验的胚胎在4°C的HEPES缓冲ERM中的4%多聚甲醛中固定1小时,然后在ERM中清洗并安装共焦成像。6.在共焦显微镜上分析样品(使用640×480像素帧缓冲器和风冷Ar-Kr激光器),同时将GFP和BODIPY TR甲酯染料与两个波长的主要Ar-Kr激光线(488和568 nm)共存。

[1]. Cooper MS, et al. Visualizing morphogenesis in transgenic zebrafish embryos using BODIPY TR methyl ester dye as a vital counterstain for GFP. Dev Dyn. 2005 Feb;232(2):359-68.