| 描述 |
3BDO 是一种新型 mTOR 激活剂,也能抑制自噬。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
mTOR
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| 体外研究 |
仅用载体3BDO显着增加RPS6KB1和EIF4EBP1的磷酸化,但用FKBP1A过表达抑制RPS6KB1和EIF4EBP1的磷酸化。雷帕霉素在3BDO存在下不能降低MTOR和RPS6KB1的磷酸化。 3BDO抑制雷帕霉素诱导的MAP1LC3B斑点的增加。 3BDO还抑制雷帕霉素在HUVEC中的作用。在用10μM雷帕霉素处理的HUVEC中,Ser残基的磷酸化降低,并且60μM3BDO逆转磷酸化。结果表明,3BDO抑制雷帕霉素诱导的MAP1LC3B斑点数,MAP1LC3B-II水平升高和SQSTM1蛋白水平降低。 3BDO可以剂量和时间依赖性地降低HUVEC中的FLJ11812水平。 FLJ11812的过度表达逆转了3BDO诱导的自噬抑制作用[1]。
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| 体内研究 |
免疫荧光测定显示,3BDO处理增加p-p70S6K的水平并降低小鼠斑块内皮中ATG13的蛋白质水平。 3BDO不影响mTOR直接下游靶标p70S6K和4EBP1的磷酸化。与对照组相比,apoE -/-小鼠在3BDO治疗中显示抑制的内皮细胞自噬和凋亡,因此3BDO可防止动脉粥样硬化中的内皮损伤。 3BDO治疗稳定了apoE -/-小鼠中已建立的动脉粥样硬化病变。在apoE -/-小鼠中,与对照组相比,使用3BDO治疗后,血清IL-6和IL-8水平显着降低[2]。
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| 激酶实验 |
在用雷帕霉素（10μM），3BDO（60μM）或两者处理6小时后，通过使用IP裂解缓冲液从HUVEC获得总蛋白。在4℃离心后，收集上清液并与蛋白A / G琼脂糖珠和TIA1抗体或正常小鼠IgG作为对照在4℃温育过夜。用IP裂解缓冲液洗涤珠子3次，然后用4×SDS上样缓冲液洗脱。用Ser磷酸化抗体通过蛋白质印迹法检测Ser磷酸化[1]。
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| 细胞实验 |
从脐带分离HUVEC，并在含有20％（v / v）胎牛血清和10IU / mL成纤维细胞生长因子2（FGF2）的M199培养基中，在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中培养。直至第10代的细胞用于实验。当HUVEC生长至80％汇合时，HUVEC用DMSO或60μM3BDO处理24小时，然后提取总RNA [1]。
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| 动物实验 |
在该研究中使用雄性apoE - / - 小鼠（8周龄）。给ApoE - / - 小鼠喂食致动脉粥样化饮食（含有21％脂肪和0.15％胆固醇）。为了避免批次饮食之间变异的潜在混杂影响，在整个实验中保留并使用单批。将20周龄的小鼠分成3组进行治疗（n = 8只小鼠/组），持续8周：对照（DMSO），低剂量3BDO（50mg / kg / d; 3BDO-L）和高剂量3BDO （100mg / kg / d; 3BDO-H）。在3BDO注射期间每周测量小鼠的体重。血液样本取自下腔静脉，动物通过放血杀死[2]。
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| 参考文献 |
[1]. Ge D, et al. Identification of a novel MTOR activator and discovery of a competing endogenous RNA regulating autophagy in vascular endothelial cells. Autophagy. 2014 Jun;10(6):957-71. [2]. Peng N, et al. An activator of mTOR inhibits oxLDL-induced autophagy and apoptosis in vascular endothelial cells and restricts atherosclerosis in apolipoprotein E?/? mice. Sci Rep. 2014 Jul 1;4:5519.
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