| 描述 |
Quizartinib (AC220) 是一种有效的 Flt3 酪氨酸激酶抑制剂,Kd值为1.6±0.7 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Kd: 1.6±0.7 nM (Flt3)[1]
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| 体外研究 |
Quizartinib(AC220)是一种新型化合物,明确优化为FLT3抑制剂,用于治疗急性髓性白血病(AML)。 Quizartinib抑制FLT3-WT和FLT3-ITD自身磷酸化,IC50分别为4.2±0.3 nM和1.1±0.1 nM。 Quizartinib抑制MV4-11和A375细胞,IC50分别为0.56±0.3 nM和> 10000 nM。 Quizartinib在细胞试验中以低纳摩尔效力抑制FLT3,并且在筛选大多数人蛋白激酶组时具有高选择性[1]。
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| 体内研究 |
Quizartinib(AC220)在体内抑制FLT3活性,每天口服一次,以低至1 mg/kg的剂量显着延长FLT3-ITD AML小鼠模型的存活率,在FLT3依赖的小鼠异种移植模型中消除肿瘤10 mg/kg,并有效抑制原发性患者细胞中的FLT3活性。通过比较3mg/kg的口服和静脉内药代动力学在大鼠中测定的Quizartinib的口服生物利用度为约40％。通过口服强饲法施用单次10mg/kg剂量的Quizartinib,并且在给药后2个时间点处死小鼠,每组使用4只动物。肿瘤样品中总FLT3和磷酸-FLT3的定量揭示了FLT3自身磷酸化的时间依赖性抑制。 FLT3活性在2小时时抑制90％,在给药后24小时抑制40％。因此,基于药代动力学实验,抑制程度与预期的游离Quizartinib血浆水平相关[1]。
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| 激酶实验 |
进行KinomeScan激酶结合测定。对于FLT3测定，使用仅跨越催化结构域的激酶构建体（氨基酸592至969）。该构建体不包括近膜结构域，旨在测量开放FLT3活性位点对抑制剂的内在结合亲和力[1]。
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| 细胞实验 |
MV4-11和RS4; 11细胞分别在含有10％胎牛血清（FBS）的Iscove培养基和10％FBS的RPMI培养基中培养。对于增殖测定，将细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，然后以每孔40000个细胞接种于96孔板中。将抑制剂（例如，Quizartinib）加入细胞中并在37℃下孵育72小时。使用Cell Titer-Blue Cell Viability Assay测量细胞活力。为了测量对FLT3自磷酸化的抑制，将细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，并在第二天以9600孔板中的每孔400000个细胞的密度接种。将细胞与抑制剂（例如，Quizartinib）在37℃下孵育2小时。为了在RS4; 11细胞中诱导FLT3自磷酸化，在2小时化合物孵育后加入100ng / mL FLT3配体15分钟。制备细胞裂解物并在预涂有总FLT3捕获抗体的96孔板中温育。将包被的平板与针对FLT3的生物素化抗体一起温育以检测总FLT3或针对磷酸酪氨酸的抗体以检测FLT3自身磷酸化。在两种情况下，SULFO标记的链霉抗生物素蛋白二抗用于Meso Scale Discovery平台上的电化学发光检测[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]使用雌性NU / NU或严重联合免疫缺陷小鼠。 Quizartinib（盐酸盐）配制成22％羟丙基-β-环糊精，CEP-701配制成20％gelucire 44/14水溶液（体积/体积），MLN-518和舒尼替尼配制成10 mM柠檬酸钠（pH值） 3.5），PKC-412以3：1 gelucire 44 / 14-丙二醇（体积/体积）配制，索拉非尼（甲苯磺酸盐）配制在80％PEG-400中。选择化合物浓度以递送10mL / kg体积的所需剂量。通过口服强饲法给予化合物，并在给药后0.25,0.5,1,2,4,6和24小时收集血浆样品。为了收集血浆样品，使用3组每组3只动物进行半视觉上的眼部出血（150μL），每只动物服用2至3个时间点以获得总共3个独立的血浆浓度时间过程。用含有内标的4体积乙腈提取血浆样品和对照（25μL），并通过液相色谱串联质谱分析。
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| 参考文献 |
[1]. Zarrinkar PP, et al. AC220 is a uniquely potent and selective inhibitor of FLT3 for the treatment of acute myeloid leukemia (AML). Blood, 2009, 114(14), 2984-2992. [2]. Puissant A, et al. SYK is a critical regulator of FLT3 in acute myeloid leukemia. Cancer Cell. 2014 Feb 10;25(2):226-42.
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