SP2509

SP2509 是有效的,选择性的 LSD1 拮抗剂,IC50 值为 13 nM。

信号通路 >> 表观遗传学 >> 组蛋白去甲基化酶

研究领域 >> 癌症

IC50: 13 nM (LSD1)[1]

SP2509(250,500,1000 nM)抑制LSD1活性,消耗菌落生长并诱导培养的人急性髓细胞白血病细胞的凋亡和细胞死亡,并增加p57 Kip,KLF4和p21启动子上的H3K4Me3并诱导p57Kip的mRNA表达,AML细胞中的KLF4和p21。 SP2509(250,1000nM)诱导培养的和原代AML细胞的形态分化特征。此外,SP2509与PS结合对培养的和原代AML细胞发挥协同致死作用[1]。 SP2509不会使CoREST-LSD1相互作用不稳定,并且对CRC没有重大的不稳定影响。 SP2509(1或10μM)诱导细胞死亡,但在0.1μM的低协同作用下没有形态学变化。 SP2509同样会干扰成神经管细胞瘤细胞的活力[2]。

用SP2509(25mg/kg)和/或PS(5mg/kg)治疗显着增强PS介导的CD34 +原代AML细胞活力的丧失,并改善携带AML异种移植物和初级移植物的小鼠的存活[2]。

为了测量LSD1的活性，使用基于鲁米诺的测定。在LSD1反应缓冲液（50mM Tris，pH8.5,50mM KCl，5mM MgCl 2,5nmol鲁米诺，20μg/ mL辣根过氧化物酶，1％Triton X-100）中稀释总共5μL洗脱液，和10加入μMH3K4me2（1-21aa）肽作为底物。添加DMSO和抑制剂。每个反应的总体积为100μL。使用EnSpire多模板读数器在428nm的发射波长下在白色96孔板中测量样品。将三个单独的纯化（n = 3）用于测定，每个纯化三次技术重复。

Daoy和D283 Med细胞用于测定。在补充有10％FBS，50U / mL青霉素和50μg/ mL链霉素的RPMI培养基1640中培养ONS-76细胞。将所有成神经管细胞瘤细胞系保持在37℃，5％CO 2/5％O 2/90％N 2气氛和最大湿度的培养箱中。 XTT测定一式三份进行（n = 3），每次使用1×103Daoy细胞/孔，4×103D283Med细胞/孔，以及1×103个ONS-76细胞/孔，在100μL培养基中进行三次重复。在96孔板中初始接种。

雌性NOD / SCID小鼠暴露于2.5Gy辐射。第二天，将500万个OCI-AmL3细胞注射到小鼠的侧尾静脉中，并监测小鼠7天。对于每种治疗，在8只小鼠的组群中施用以下治疗：单独的载体，25mg / kg SP2509,5mg / kg panobinostat和SP2509加上panobinostat。对于OCI-AmL3细胞，在第7天开始治疗。 SP2509（配制在增溶缓冲液[20％Cremaphor，20％DMSO，60％无菌水]）每周两次（周二和周四）腹膜内（IP）给药3周，然后停药。 Panobinostat（在5％DMSO / 95％生理盐水中配制）通过IP注射每周3天（MWF）施用3周并且中断。在这些研究中使用的PS剂量被确定为安全有效的。利用NSG小鼠和原代AmL细胞进行单独的体内实验。植入AmL细胞（外周血中存在大于1％的CD45 +细胞）后，用SP2509和/或PS处理小鼠三周。

[1]. Fiskus W, et al. Highly effective combination of LSD1 (KDM1A) antagonist and pan-histone deacetylase inhibitor against human AML cells. Leukemia. 2014 Nov;28(11):2155-64.

[2]. Inui K, et al. Stepwise assembly of functional C-terminal REST/NRSF transcriptional repressor complexes as a drug target. Protein Sci. 2017 Feb 20.

GSK-J4 | QC6352 | GSK2879552 | 6-异丙基-7-氧代-5-苯基-4,7-二氢吡唑并[1,5-A]嘧啶-3-腈 | 反苯环丙胺半硫酸盐 | 5-羰基-8-羟基喹啉 | ML324 | GSK-LSD1二盐酸盐 | NCGC00244536 | 丁酰肼 | ORY-1001(反式) | 5-氯-2(1H)-吡啶酮 (2E)-(苯基-2-吡啶基亚甲基)腙 | AS8351 | KDM5-IN-1 | KDM5A-IN-1