LY2603618的作用 - 生物活性 - 靶点活性

LY2603618，别名Rabusertib，CAS号911222-45-2 。它是细胞周期关卡激酶2（chk2）的抑制剂，具有潜在的化学增强活性，并且已用于研究治疗癌症，实体瘤，晚期癌症，胰腺肿瘤和非小细胞肺癌的试验。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍LY2603618的生物活性：

1）体外活性
Chk1是ATP依赖性丝氨酸 - 苏氨酸激酶，是由双链断裂（DSB）激活的DNA复制监测检查点系统中的关键组分。Chk1有助于所有当前定义的细胞周期检查点，包括G1 / S，S期内，G2 / M和有丝分裂纺锤体检查点。通过抑制chk1的活性，LY2603618阻止由DNA损伤剂引起的DNA修复，从而增强各种化学治疗剂的抗肿瘤功效。然而，涉及LY2603618的临床前数据至今尚未公布。[1]

预计抑制Chk1会增强抗代谢物如吉西他滨的作用。[2] LY2603618处理损害DNA合成，增加DNA损伤（通过有丝分裂缺陷），诱导细胞凋亡，并与培美曲塞具有协同活性，尤其是在p53突变肿瘤细胞中。[3]

2）体内活性
携带Calu-6异种移植物的小鼠用150mg / kg（IP）吉西他滨和单次同时200mg / kg口服剂量的LY2603618处理。200mg / kg的LY2603618足以在2小时内体内抑制85％的Chk1自身磷酸化。LY2603618也有效地减少了吉西他滨诱导的Tlk丝氨酸695的磷酸化，支持了引用的报道，选择性化学抑制剂Chk1 [1]。

我们已经了解了LY2603618的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
将细胞以每孔2.5×103铺板于96孔组织培养板上并孵育一个细胞倍增（18-24小时）。吉西他滨稀释液通过半对数步骤设定，最终浓度范围为1-1000nM。通过在DMSO中稀释至5000×终浓度制备LY2603618，然后将1000倍稀释到培养基中以产生5x原液以添加到孔中。加入吉西他滨后约24小时，加入LY2603618。每种组合一式三份进行。

在添加LY2603618后两次细胞倍增一段时间后，根据制造商的说明将MTS / PMS试剂加入每个孔中。在Spectra Max 250分光光度计上在490nm处读取吸光度，并用GraphPad Prism 4.0分析数据。剂量 - 反应曲线通过非线性回归拟合，底部拟合约束为0％抑制[1]。

2）动物实验
小鼠[1]-雌性Harlan无胸腺裸鼠（26-28g）用于这些研究。通过在每只受试动物的后胁腹中的无血清生长培养基和基质胶的1：1混合物中皮下注射1×106Calu-6细胞来开始肿瘤生长。当肿瘤体积达到约150mm 3时，通过肿瘤大小和体重随机化动物，并将其置于它们各自的治疗组中。每只动物接受2次注射，其中一种盐水载体或150mg / kg吉西他滨通过腹膜内注射以200μL的体积施用，另一种是Captisol载体或LY2603618以200μL的体积口服施用。

3）激酶实验
蛋白激酶测定以不同方式进行。对以下蛋白激酶进行测定：ABL，AKT1，ARG，CAMK2，CDK1，CDK2，CHK1，CHK2，DAPK1，EGFR，EPHA1，EPHB2，EPHB3，EPHB4，ERK1，ERK2，FES，FGFR1，FGFR3，FGFR4，FGR ，HCK，HER2，INSR，JNK1，JNK2，LCK，MET，NTRK1，NTRK2，p38α，p38β，p38δ，p38γ，p70S6K，PDGFRα，PDGFRβ，PDK1，PKCα，ROCK2，ROS，RSK2，SGK1，SRC，SYK， TAK1，TYRO3，VEGFR2，VEGFR3，YES，ZAP70 [1]。

今天介绍了LY2603618的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，LY2603618是一种有效的选择性的 Chk1 抑制剂，IC50为7 nM。它的靶点活性是Chk1,7nM；PDK1,893nM

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参考文献：
[1]. King C, et al. Characterization and preclinical development of LY2603618: a selective and potent Chk1 inhibitor. Invest New Drugs. 2014 Apr;32(2):213-26.
[2]. Wang G, et al. Panobinostat synergistically enhances the cytotoxic effects of cisplatin, doxorubicin or etoposide on high-risk neuroblastoma cells. PLoS One. 2013 Sep 30;8(9):e76662.