【Pracinostat】- 作用 - 生物活性 - 靶点活性

Pracinostat，别名SB939，它是一种新型HDAC抑制剂，与目前临床试验中的其他HDAC抑制剂相比，具有改善的体内特性，允许口服给药。数据表明，Pracinostat是一种有效且有效的抗肿瘤药物，具有作为各种人类血液和实体肿瘤的口服疗法的潜力。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍Pracinostat的生物活性：

1）体外活性
Pracinostat（SB939）是一种有效的新型基于异羟肟酸的HDACs I，II和IV抑制剂，抑制分离的酶，Ki为19至48 nM（I类），16至247 nM（II类），和43 nM（IV类），但对III类同工酶SIRT I没有活性.SB939对HCT-116结肠癌细胞系和HL-60急性髓细胞白血病细胞系有影响，IC50分别为0.48μM和70 nM 。SB939在浓度高达100μM时不抑制正常人真皮成纤维细胞的增殖[1]。Pracinostat（SB939，化合物3）抑制CYP2C19，IC50为5.78μM。SB939显示针对A2780，COLO 205，HCT-116和PC-3细胞系的有效活性，IC50为0.48±0.21,0.56±0.08,0.48±0.27和0.34±0.06 [2]。Pracinostat下调JAK2V617F和FLT-ITD细胞系中的JAK和FLT3信号传导，并显示与pacritinib组合的协同作用。Pracinostat和pacritinib显示STAT信号传导和细胞凋亡的体外协同作用。Pracinostat有效抑制不同AML亚型作为单一药物的增殖，并且与JAK2V617F或FLT3-ITD AML细胞系中的pacritinib具有协同作用[3]。

2）体内活性
Pracinostat（SB939,25-100mg / kg）显示HCT-116异种移植物的显着剂量依赖性生长抑制。SB939选择性地在肿瘤组织中累积。SB939（50或75 mg / kg）在Apcmin基因结肠癌小鼠模型中显示出抗肿瘤活性[1]。在携带MV4-11异种移植物的小鼠中，Pracinostat（25或50mg / kg每天，持续21天）分别诱导显着抑制肿瘤生长（TGI）59和116％。Pracinostat（75mg / kg，q.o.d）与pacritinib组合在两种不同的人AML模型中在体内是有效的和协同的。Pracinostat和pacritinib对AML诱导的血浆细胞因子/生长因子/趋化因子具有协同作用[3]。

我们已经了解了Pracinostat的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
在对数生长期，将细胞以预定的最佳密度接种在96孔板中，并在用SB939处理之前分别静置24小时（贴壁细胞）或2小时（悬浮细胞）。所有实验一式三份进行96小时，1％溶剂，使用针对贴壁细胞的CyQUANT细胞增殖测定试剂盒或用于悬浮细胞的CellTiter96 Aqueous One溶液细胞增殖试剂盒，总体积为100μL，SB939浓度来自 在9个连续稀释步骤中为100μM至1.5nM。IC50使用XLfit软件[1]确定。

2）动物实验
给雄性ApcMin / +小鼠和雌性C57BL / 6小鼠喂食标准啮齿动物饮食。具有确认的突变的小鼠，在16至20.5周龄之间，在hemocult测定中具有阳性评分被招募到实验中。在治疗期间，腹腔注射小鼠。用40mg / kg的5-FU，体积为200μL/ 20g体重，每天一次，治疗5天，然后进行9天的恢复期和另外5天的治疗。每天口服50或75mg / kg口服SB939，连续给药21天。在治疗的最后一天，取出小肠，盲肠和结肠; 通过多次注射4％PBS缓冲的甲醛固定到肠腔中; 切成段; 并平放在甲醛浴中的塑料薄膜上。在解剖显微镜中测量肿瘤负荷。对样品的评估和分析是盲法的[1]。

3）激酶实验
HDAC酶测定：克隆所有重组HDAC酶（SIRT1除外）并在S * BIO中表达。反应混合物含有2.5或5μLHDAC同工酶，测定缓冲液（25mM Tris-HCl，pH 7.5; 137mM NaCl; 2.7mM KCl，1mM MgCl 2和1mg / mL BSA），不同浓度的SB939，和 将总反应体积为33μL的荧光脱乙酰酶底物Flour de LysTM在室温下温育2小时。加入16μLFlourde LysTM显色剂并再温育10分钟。在酶标仪中在460nm处测量发射的光。使用XLfit软件生成IC50值。

今天介绍了Pracinostat的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，Pracinostat是一种有效的组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，对 HDACs 的 IC50 值为 40-140 nM，可用于癌症研究。它的靶点活性是HDAC1,49nM；HDAC10,40nM；HDAC11,93nM；HDAC2,96nM；HDAC3,43nM；HDAC4,56nM；HDAC5,47nM；HDAC6,1.008μM；HDAC7,137nM；HDAC8,140nM；HDAC9,70nM。

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参考文献：
[1]. Novotny-Diermayr V, et al. SB939, a novel potent and orally active histone deacetylase inhibitor with high tumor exposure and efficacy in mouse models of colorectal cancer. Mol Cancer Ther. 2010 Mar;9(3):642-52.
[2]. Wang H, et al. Discovery of (2E)-3-{2-butyl-1-[2-(diethylamino)ethyl]-1H-benzimidazol-5-yl}-N-hydroxyacrylamide (SB939), an orally active histone deacetylase inhibitor with a superior preclinical profile. J Med Chem. 2011 Jul 14;54(13):4694-720.
[3]. Novotny-Diermayr V, et al. The oral HDAC inhibitor pracinostat (SB939) is efficacious and synergistic with the JAK2 inhibitor pacritinib (SB1518) in preclinical models of AML. Blood Cancer J. 2012 May;2(5):e69.