AMG 925 HCl

AMG 925 HCl 是一种有效的选择性的 FLT3/CDK4 双重抑制剂,IC50 分别为 2±1 nM 和 3±1 nM。

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> FLT3

研究领域 >> 癌症

FLT3:2 nM (IC50)

CDK4:3 nM (IC50)

CDK6:8 nM (IC50)

CDK2:375 nM (IC50)

CDK1:1.9 μM (IC50)

AMG 925还在激酶测定中抑制CDK6,CDK2和CDK1,IC50分别为8±2nM,375±150nM,1.90±0.51μM。 AMG 925的总体激酶选择性是由KinomScan针对一组442种不同激酶测定的。通过比较其在RB阳性(RB +)和RB阴性(RB-)非急性髓细胞中的生长抑制活性来评估AMG 925的细胞选择性(靶标与脱靶活性)约为50倍。白血病(AML)癌细胞系。 AMG 925有效抑制AML细胞系MOLM13(FLT3-ITD; IC50 =19μM)和Mv4-11(FLT3-ITD; IC50 =18μM)的生长[1]。

MOLM13荷瘤小鼠每天两次口服给药,间隔6小时给予12.5,25或37.5mg/kg AMG 925.然后在第一次给药后3,9,12和24小时收集肿瘤,并分析水平P-STAT5和P-RB。在37.5mg/kg剂量的AMG 925下,分别在6小时和12小时达到P-STAT5和P-RB的最大抑制。有趣的是,观察到24小时时P-STAT5的反弹,这可能是由于补偿反馈。 P-STAT5和P-RB抑制的药效学反应与AMG 925的血浆浓度相关.AMG 925抑制AML异种移植肿瘤生长96％至99％而没有显着的体重减轻。 AMG 925的抗肿瘤活性与STAT5和视网膜母细胞瘤蛋白(RB)磷酸化的抑制相关,分别是抑制FLT3和CDK4的药效学标志物。此外,还发现AMG 925抑制对目前FLT3抑制剂(例如AC220和索拉非尼)具有抗性的FLT3突变体(例如,D835Y)[1]。

使用MOLM13和Mv4-11。通过用pLV218G荧光素/慢病毒载体转导MOLM13细胞构建MOLM13-Luc细胞，其在鼠EF1α启动子下表达荧光素酶。通过在含有递增浓度的索拉非尼（1-1nM）的生长培养基中传代细胞来分离索拉非尼抗性MOLM13（MOLM13sr）和Mv4-11（Mv4-11sr）。通过DNA合成测定法测量细胞生长。将细胞以5×10 3细胞/孔的密度接种在96孔Cytostar T板中，总体积为160μL。将测试化合物（例如，AMG 925; 0.03和0.3μM）连续稀释到板（20μL/孔）中，并向每个孔中加入20μL/0.1μCi的[14 C] - 胸苷。在进一步孵育72小时后，使用β平板计数器测定同位素掺入。通过使用Vybrant Apoptosis Assay Kit测定细胞凋亡。简而言之，将细胞以每孔5×10 5个细胞接种到6孔板中，并用化合物（例如，AMG 925; 0.003,0.01,0.03,0.1,0.3和1μM）处理24小时。然后用试剂盒中提供的试剂染色细胞，并通过流式细胞术分析。 Sytox Green荧光与别藻蓝蛋白荧光点图显示活细胞，凋亡细胞和死细胞的分辨率，使用Flowjo软件进行定量。通过用AMG 925处理细胞24小时然后使用CycleTest试剂盒进行细胞周期分析。获得了一万个事件，并且使用ModFit软件[1]计算每个循环阶段中的细胞比例。

使用小鼠[1] CrTac：NCR-Foxn1nu（NCR）裸鼠。将2×10 6个细胞接种在NCR裸鼠的侧腹上并使其生长13天。然后每天两次给予小鼠口服给药6小时，分别用12.5,25,37.5和50mg / kg的AMG 925连续10天[1]。

[1]. Keegan K, et al. Preclinical evaluation of AMG 925, a FLT3/CDK4 dual kinase inhibitor for treating acute myeloid leukemia. Mol Cancer Ther. 2014 Apr;13(4):880-9.

N-[5-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶基]-5-氟-4-[4-氟-2-甲基-1-异丙基-1H-苯并咪唑-6-基]-2-嘧啶胺甲烷磺酸盐 | 瑞博西尼 | Dinaciclib | THZ1 | Roscovitine | 吉瑞替尼 | THZ531 | 2-[[(噻吩-2-基)甲基]氨基]-5-[1-(喹啉-6-基)甲-(Z)-亚基]噻唑-4-酮 | 奎扎替尼 | 夫拉平度 | NVP-2 | 帕西替尼(SB1518) | 阿维西利 | CYC065 | 利尼伐尼