A 419259三盐酸盐

A 419259 trihydrochloride是Src家族激酶抑制剂,对 Src,Lck 和Lyn 的 IC50 分别为9 nM,3 nM,3 nM。

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> SRC

研究领域 >> 癌症

IC50: 9 nM (Src), <3 nM (Lck), <3 nM (Lyn), 3 μM (Abl)[1]

A 419259 Trihydrochloride是第二代吡咯并嘧啶,旨在提高相对于其他细胞质酪氨酸激酶对Src家族的选择性。 A-419259抑制K-562细胞,IC50在0.1和0.3μM之间,Meg-01增殖,IC50约为0.1μM。 A-419259还有效诱导K-562细胞凋亡,从0.1μM开始并以剂量依赖性方式增加。 PP2抑制Ph +细胞系(K-562和Meg-01)中的Src激酶自磷酸化,IC50在3和10μM之间,而A-419259阻断0.1和0.3μM之间的激酶活化。在缺乏IL-3的情况下,A-419259强烈抑制DAGM/Bcr-Abl细胞增殖,IC50在0.1和0.3μM之间[1]。 A-419259是一种广谱的吡咯并嘧啶抑制剂,可阻断CML细胞系的增殖并诱导细胞凋亡。 A-419259抑制K562和其他CML细胞系中的整体SFK活性,IC50值为0.1-0.3μM[2]。

对His（6）标记的Lck（残基62-509）和从Sf-9细胞纯化的全长c-Abl以及Lyn，Src和PKC的商业来源进行体外激酶测定。用基于ELISA的测定法测量Lck，Lyn，Src和Abl活性。将平底96孔ELISA板与200μg/ mL聚（Glu，Tyr）4：1底物在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中的溶液在37℃温育1小时，然后用含有0.1％吐温的PBS洗涤。 -20（PBS-T）。在激酶测定缓冲液（250mM Mopso，pH 6.75,10mM MgCl 2,2mM MnCl 2,2.5mM DTT，0.02％BSA，2mM Na 3 VO 4,5％DMSO，5）中加入已经含有适当酶的洗涤板中的抑制剂稀释液。 μMATP）。在室温下孵育20分钟后，用PBS-T洗涤平板三次，用抗磷酸酪氨酸-HRP抗体偶联物检测平板结合的磷酸酪氨酸，随后用K-Blue试剂显色。所有分析都经过优化，使用最少量的酶来获得可重复的信噪比[1]。

K-562细胞在补充有10％胎牛血清（FCS）和50μg/ mL庆大霉素的RPMI 1640中生长。 Meg-01细胞在Vitacell修饰的RPMI 1640（ATCC）中培养，补充有10％FCS和50μg/ mL庆大霉素。人GM-CSF依赖性骨髓性白血病细胞系TF-1在补充有10％FCS，50μg/ mL庆大霉素和1ng / mL重组人GM-CSF的RPMI 1640中生长。在补充有10％FCS，50μg/ mL庆大霉素和0.5ng / mL重组IL-3的RPMI 1640中培养DAGM鼠髓细胞白血病细胞。在DMSO中制备浓缩的PP2（5mM）和A-419259（2mM）的储备溶液，并储存在-20℃。使用活/死生长测定法测量细胞增殖。该测定使用钙黄绿素-AM，一种荧光酯酶底物，其被活细胞吸收并在细胞内水解，释放出绿色荧光产物。简而言之，对于4天时间过程中的每一天，每孔在96孔板中铺板104个细胞。向孔中加入各种浓度的PP2，A-419259或载体对照（每个浓度每天5个孔），并将板在37℃温育。在每个时间点，将一个板以1500g离心10分钟以沉淀细胞。用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞，并向每个孔中加入钙黄绿素-AM至终浓度为1μM。将板在黑暗中在室温下孵育1小时。然后使用SpectraMax Gemini XS荧光板读数器在485 / 530nm（激发/发射）下读板，并用SoftMax Pro软件[1]分析数据。

[1]. Wilson MB, et al. Selective pyrrolo-pyrimidine inhibitors reveal a necessary role for Src family kinases in Bcr-Abl signal transduction and oncogenesis. Oncogene. 2002 Nov 21;21(53):8075-88.

[2]. Pene-Dumitrescu T, et al. An inhibitor-resistant mutant of Hck protects CML cells against the antiproliferative and apoptotic effects of the broad-spectrum Src family kinase inhibitor A-419259.Oncogene (2008) 27, 7055-7069

萨拉卡蒂尼(AZD0530) | PP2 (AG 1879) | N-[3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基]-N'-[2-氟-4-[(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基)氧]苯基]脲 | 2,3-二氢-N,N-二甲基-2-氧代-3-[(4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-2-基)亚甲基] -1H-吲哚-5-磺酰胺 | 4-氨基-1-叔丁基-3-(1’-萘)吡唑并[3,4-d]嘧啶 | 2,6-二甲基苯基 N-[2,4-二(甲氧基)苯基][2-[[4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-4-嘧啶基]氨基甲酸酯 | 培利替尼 | 7-二甲氧基-N-(4-苯氧基苯基)- 氨基喹唑啉 | ENMD-2076 | Lck抑制剂 | PD173955 | TG 100572盐酸盐 | N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-[[3-异丙基-5-异恶唑基]甲基]-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,4-嘧啶二胺 | AD80 | 蛋白磷酸酯酶-1(抗原)