UNC3866

UNC3866 是一种有效的 CBX7-H3 拮抗剂,IC50 为 66±1.2 nM。

信号通路 >> 表观遗传学 >> 组蛋白甲基转移酶

研究领域 >> 癌症

IC50: 66±1.2 nM (CBX7)[1]

UNC3866,Polycomb CBX和CDY家族的chromodomains甲基赖氨酸(Kme)读取功能的有效拮抗剂。 UNC3866最有效地结合CBX4和CBX7的chromodomains,每个Kd为100 nM,与其他七个CBX和CDY chromodomains相比具有6-18倍的选择性,同时相对于> 250个其他蛋白质靶标具有高选择性。 UNC3866抑制PC3细胞增殖,这是一种已知的CBX7表型,而甲基化阴性对照化合物UNC4219的作用可忽略不计。 UNC3866是PRC1 chromodomains的有效和细胞活性拮抗剂。 UNC3866是CBX7报道的最有效的配体,Kd为97±2.4 nM。 UNC3866与CBX4等效,与CBX7最相似,而CBX4/6分别对CBX2,-6和-8的选择性分别为18倍,6倍和12倍。此外,UNC3866对CBX4/7的选择性比CDY1高65倍,对CBX4/7的选择性高于CDYL1b和CDYL2的9倍[1]。

UNC3866对G9a，EHMT1，SUV39H1，SUV39H2，SETDB1，SETD8，SUV420H1，SUV420H2，SETD7，MLL1三聚体复合物，MLL3四聚体复合物，EZH2三聚体复合物，PRMT1，PRMT3，PRMT5-MEP50复合物，PRMT6的甲基转移酶活性的影响，通过使用闪烁亲近测定法（SPA）监测氚标记的甲基与肽底物的赖氨酸或精氨酸残基的掺入来评估PRMT7，PRMT8，PRDM9，SETD2，SMYD2，SMYD3，BCDIN3D和DNMT1。测定在含有3H-SAM的20μL反应混合物中进行，底物浓度接近每种酶的Km值。在所有选择性测定中使用三种浓度（1μM，10μM和50μM）的UNC3866。为了停止酶促反应，加入7.5M盐酸胍，然后加入180μL缓冲液（20mM Tris，pH8.0）。将反应混合，然后转移到96孔FlashPlate中。将Flash板中的反应混合物温育1小时，并使用TopCount读板仪测量CPM。对于每个数据集，在没有化合物的情况下的CPM计数被定义为100％活性。在没有酶的情况下，每个数据集中的CPM计数被定义为背景（0％）[1]。

将PC3细胞以200个细胞/孔接种到24孔板中。使细胞粘附过夜。然后将培养基（补充有10％FBS的DMEM）与含有DMSO，UNC3866或UNC4219的新鲜培养基交换。在第三天，用含有DMSO，UNC3866或UNC4219的新鲜培养基更换培养基。对于剂量反应研究，EC50来自六点滴定，范围为100μM至0.4μM的UNC3866或UNC4219。在第0,3或6天，将细胞用冰冷的甲醇固定30秒。并用PBS再水化。用DAPI（0.05μg/ mL）染色细胞核，并使用高含量显微镜进行计数。对于剂量反应研究，将UNC3866-或UNC4219处理的细胞的细胞计数标准化为DMSO处理的细胞的平均细胞计数。使用GraphPad Prism 5 [1]中的“log [抑制剂]与标准化响应 - 可变斜率”方程计算EC50。

[1]. Stuckey JI, et al. A cellular chemical probe targeting the chromodomains of Polycomb repressive complex 1. Nat Chem Biol. 2016 Mar;12(3):180-7.

GSK126 | Tazemetostat (EPZ-6438) | UNC0642 | 1-异丙基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-吡啶基]-1H-吲唑-4-甲酰胺 | 匹诺司他 | 3-去氮腺嘌呤A | GSK3326595 | N-[(1,2-二氢-6-甲基-2-氧代-4-丙基-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-3-吡啶基]-1H-吲唑-4-甲酰胺 | 2-(六氢-4-甲基-1H-1,4-二氮杂卓-1-基)-6,7-二甲氧基-N-[1-(苯基甲基)-4-哌啶基]-4-喹唑啉胺 | EPZ031686 | AZ505二三氟乙酸盐 | N1-甲基-N1-[[4-[4-(异丙氧基)苯基]-1H-吡咯-3-基]甲基]-1,2-乙二胺 | EPZ004777 | EPZ015666 | GSK591