AS601245

AS601245 是一种 JNK 抑制剂,抑制 hJNK1,hJNK2 和 hJNK3,IC50 分别为 150, 220 和 70 nM。

信号通路 >> MAPK/ERK信号通路 >> JNK

研究领域 >> 癌症

hJNK1:150 nM (IC50)

hJNK2:220 nM (IC50)

hJNK3:70 nM (IC50)

AS601245以ATP竞争性方式抑制分离的hJNK3。 AS601245的选择性针对大量激酶进行测试。 AS601245的选择性比c-src,CDK2和c-Raf高10至20倍,对一系列Ser/Thr和Tyr蛋白激酶的选择性超过50至100倍[1]。分析单独或相关的AS601245和Clofibrate对CaCo-2人结肠癌细胞的增殖,凋亡,分化和基因表达谱的影响。在HepG2细胞中也观察到细胞增殖的减少,伴随着p21表达的调节。 5μM氯贝特,0.1μMAS601245,以及两种物质的联合治疗不会在HepG2细胞中引起急性毒性。所有处理从实验开始后48小时开始减少细胞增殖,并且抑制效果在72小时达到最大值[2]。

AS601245是LPS诱导的小鼠TNF-α释放的有效抑制剂。 AS601245以0.3,1,3和10mg/kg口服给药,以剂量依赖性方式降低TNF-α的释放。腹膜内施用AS601245(40,60和80mg/kg)对瞬时全脑缺血的沙鼠模型中的海马CA1神经元的延迟丧失提供显着保护。该作用由JNK抑制介导,因此通过c-Jun表达和磷酸化介导。 AS601245通过腹腔注射(6,18和60 mg/kg)或静脉推注(1 mg/kg),然后静脉输注(0.6 mg/kg/h)给予显着的神经保护作用。局灶性脑缺血后[1]。

大鼠JNK3测定在96孔低结合康宁MTT板中进行：0.5μg重组，预活化的GST-JNK3与1μg重组，生物素化的GST-c-Jun和2μM[33Pγ] ATP（2 nCi /μl）一起孵育），在存在或不存在式I化合物的情况下，在50μL含有50mM Tris-HCl，pH8.0的反应体积中; 10mM MgCl 2,1mM二硫苏糖醇和100μMNaVO4，在室温下120分钟。通过在磷酸盐缓冲液中加入200μL含有250μg链霉抗生物素蛋白包被的SPA珠，5mM EDTA，0.1％Triton X-100和50μMATP的溶液，并在室温下进一步温育，停止反应。 60分钟孵育后，通过在1500g离心5分钟沉淀珠子，重悬于200μL含有5mM EDTA，0.1％Triton X-100和50μMATP的磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，并在闪烁中测量放射性。通过在室温下沉降60分钟进一步沉淀珠粒，进行β计数器。类似的方法用于证明JNK1和JNK2的抑制[1]。

通过使用试剂盒“CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay”评估CaCo-2细胞增殖。这种高度灵敏的分析检测代谢活性细胞释放的发光。发光的定量表示为RLU（相对光单位）。对于增殖实验，通过将药物（例如，0.1μMAS601245）添加至在96孔板中以约4,000个细胞/孔接种的CaCo-2细胞来进行处理。通过MTT方法分析HepG2细胞增殖。简而言之，将1500个细胞/孔接种在200μL补充血清的培养基中，第二天用药物（例如，0.1μMAAS601245）处理。随后将20μL5mg/ mL噻唑基蓝四唑溴化物加入细胞中并在2小时后取出。向细胞中加入100μLDMSO，通过96孔板ELISA读数器在570nm记录吸光度。通过台盼蓝排除试验评估生存力[2]。

小鼠[1] C3H / HEN小鼠接受AS601245（0.3,1,3或10mg / kg）的口服治疗。 15分钟后，腹腔注射内毒素（0.3 mg / kg）。在异氟烷麻醉下通过眼眶后穿刺收集肝素化的全血。使用酶联免疫吸附测定试剂盒在血浆中测定TNF-α。对照动物接受0.5％CMC / 0.25％吐温20（10mL / kg）作为载体[1]。将大鼠[1] Wistar大鼠随机分为载体处理对照组，参照化合物处理组和药物处理组。参比化合物治疗组在缺血发作后1小时接受MK-801（3mg / kg ip）。药物处理组在再灌注开始时和5小时后接受AS601245（6,18或60mg / kg）。对照动物接受0.9％盐水（10ml / kg ip）。 Wistar大鼠随机分为三组。参比化合物治疗组在缺血发作后1小时接受MK-801（3mg / kg ip）。药物处理组在再灌注开始时静脉推注AS601245（1mg / kg），然后在22小时内静脉输注，流速为0.6mg / kg / h。对照动物接受推注加静脉输注0.9％生理盐水（10 mL / kg）[1]。

[1]. Carboni S, et al. AS601245 (1,3-benzothiazol-2-yl (2-[[2-(3-pyridinyl) ethyl] amino]-4 pyrimidinyl) acetonitrile): a c-Jun NH2-terminal protein kinase inhibitor with neuroprotective properties. J Pharmacol Exp Ther. 2004 Jul;310(1):25-32.

[2]. Cerbone A, et al. AS601245, an Anti-Inflammatory JNK Inhibitor, and Clofibrate Have a Synergistic Effect in Inducing Cell Responses and in Affecting the Gene Expression Profile in CaCo-2 Colon CancerCells. PPAR Res. 2012;2012:269751.

吡唑蒽酮(SP600125) | JNK-IN-8 | 番茄碱 | Tanzisertib | 黄芪甲苷IV | d-JNKI-1 | 3-[[4-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丁烯-1-基]氨基]-N-[4-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]苯甲酰胺 | BI-78D3 | 2-[[2-[(3-羟基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]苯甲酰胺 | SR-3306 | (1,3-苯并噻唑-2-基)[2-[4-[(吗啉-4-基)甲基]苄氧基]嘧啶-4-基]乙腈 | 3-[3-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-5-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-1H-吲唑盐酸盐 | 人参皂苷Re | 异牡荆黄素 | 胡桃苷