Dinaciclib

Dinaciclib 是一种有效的选择性 CDK 抑制剂,抑制 CDK2,CDK5,CDK1 和 CDK9 的 IC50 分别为 1,1,3 和 4 nM。

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> CDK

研究领域 >> 癌症

CDK2:1 nM (IC50)

CDK5:1 nM (IC50)

CDK1:3 nM (IC50)

CDK9:4 nM (IC50)

Dinaciclib(SCH 727965)是一种有效的DNA复制抑制剂,可阻断胸腺嘧啶(dThd)DNA在A2780细胞中的掺入,IC50为4 nM。 Dinaciclib(100 nM)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)肿瘤抑制蛋白的磷酸化,并诱导p85 PARP caspase裂解产物的积累[1]。 Dinaciclib(SCH727965)以剂量依赖性方式抑制胰腺癌细胞的体外细胞生长。在与Dinaciclib孵育72小时后,对于MIAPaCa-2和Pa20C细胞,GI50分别为约10和20nM。这些结果与Dinaciclib在其他癌细胞系中的研究一致。在软琼脂测定中,5至10nM的Dinaciclib显着减少MIAPaCa-2细胞的集落形成和锚定独立生长。此外,使用BD FluoroChrom,改良的Boyden Chamber和伤口愈合测定[2]证明,通过Dinaciclib浓度从2-5nM开始,Pa20C和MIAPaCa-2细胞的体外细胞迁移显着降低。

Dinaciclib(8,16,32和48mg/kg,ip)分别导致肿瘤抑制70％,70％,89％和96％; Dinaciclib(SCH 727965)耐受性良好,最高剂量组的最大体重减轻为5％。 Dinaciclib在小鼠中具有短的血浆半衰期。腹腔注射小鼠腹腔注射5 mg/kg Dinaciclib,血浆半衰期约为0.25小时[1]。使用Dinaciclib(SCH727965)进行治疗,每周两次ip剂量40mg/kg,持续4周,引起显着的肿瘤生长抑制(TGI)在10/10(100％)的低传代皮下胰腺异种移植物中测试[2]。

从Sf9细胞中纯化重组细胞周期蛋白/ CDK全酶，所述Sf9细胞经工程改造以产生表达特定细胞周期蛋白或CDK的杆状病毒。通常在含有50mM Tris-HCl（pH 8.0），10mM MgCl 2,1mM DTT和0.1mM原钒酸钠的激酶反应缓冲液中将细胞周期蛋白/ CDK复合物稀释至终浓度为50μg/ mL。对于每个激酶反应，将1μg酶和20μL2μM底物溶液（衍生自组蛋白H1的生物素化肽）混合并与10μL稀释的Dinaciclib（SCH727965）组合。通过添加50μL的2μMATP和0.1μCi的33P-ATP开始反应。将激酶反应在室温下温育1小时，并通过加入0.1％Triton X-100,1mM ATP，5mM EDTA和5mg / mL链霉抗生物素蛋白包被的SPA珠来终止。使用96孔GF / B滤板和Filtermate通用收获机捕获SPA珠。珠子用2M NaCl洗涤两次，用含有1％磷酸的2M NaCl洗涤两次。然后使用TopCount 96孔液体闪烁计数器测定信号。剂量 - 反应曲线由抑制性化合物的一式八份连续稀释产生。 IC50值通过非线性回归分析得出[1]。

将A2780细胞接种到组织培养皿上并用合适的生长培养基繁殖。将生长的培养物暴露于增加浓度的Dinaciclib（0.75,1.5,3.15,6.25,12.5,25和500nM）或媒介物对照，通常持续7天。除去培养基后，将细胞用50％甲醇/ 50％丙酮固定5分钟，并用0.2％结晶紫在2％乙醇中染色5分钟。染色后，用5至10mL水洗涤细胞。将染色的细胞溶解在1％脱氧胆酸中，并使用SOFTmax PRO 4.3读板仪在600nm下测量所得溶液的吸光度。将Dinaciclib处理的样品的吸光度绘制为载体处理的对照的吸光度的百分比，并将数据报告为相对于这些对照的IC 50值。对于悬浮细胞系，使用alamarBlue Cell Viability Assay试剂盒[1]获得细胞活力的评估。

小鼠[1]对于肿瘤植入，在体外培养特定细胞系，用PBS洗涤一次，并重悬于PBS中的50％基质胶中至终浓度为4×107至5×10 7个细胞/毫升。在侧腹区域向裸鼠注射0.1mL该悬浮液sc。肿瘤长度（L），宽度（W）和身高（H）通过卡尺每周两次测量每只小鼠，然后使用公式（L×W×H）/ 2计算肿瘤体积。当肿瘤体积达到100mm 3时，将动物随机分配至治疗组（10只小鼠/组），并用Dinaciclib（每天8,16,32和48mg / kg，ip）或单独的化学治疗剂腹膜内注射治疗。给药时间表见表和图例。在治疗期间和之后测量肿瘤体积和体重。

[1]. Parry D, et al. Dinaciclib (SCH 727965), a novel and potent cyclin-dependent kinase inhibitor. Mol Cancer Ther. 2010 Aug;9(8):2344-53.

[2]. Feldmann G, et al. Cyclin-dependent kinase inhibitor Dinaciclib (SCH727965) inhibits pancreatic cancer growth and progression in murine xenograft models. Cancer Biol Ther. 2011 Oct 1;12(7):598-609.

[3]. Feldmann G, et al. Cyclin-dependent kinase inhibitor Dinaciclib (SCH727965) inhibits pancreatic cancer growth and progression in murine xenograft models. Cancer Biol Ther. 2011 Oct 1;12(7):598-609.

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