Pilaralisib

Pilaralisib (XL147; SAR245408) 是一种有效的选择性 I 类 PI3Ks 抑制剂,抑制 PI3Kα,PI3Kβ,PI3Kγ 和 PI3Kδ,IC50 分别为 39 nM,383 nM,23 nM 和 36 nM。

研究领域 >> 癌症

PI3Kα:39 nM (IC50)

PI3Kβ:383 nM (IC50)

PI3Kδ:36 nM (IC50)

PI3Kγ:23 nM (IC50)

Vps34:6974 nM (IC50)

DNA-PK:4750 nM (IC50)

Pilaralisib(XL147)显示出对I类PI3K同种型p110α,p110δ和p110γ的有效抑制活性,IC50分别为39,36和23 nM。 Pilaralisib(XL147)对剩余的I类同种型p110β的效力较低,IC50值为383 nM。 Pilaralisib(XL147)抑制PI3Kα的IC50值在不同浓度的ATP下测定,显示XL147是ATP竞争性抑制剂,平衡抑制常数(Ki)值为42 nM。 Pilaralisib(XL147)对III类PI3K液泡分选蛋白34(VPS34; IC50值~7.0M)和PI3K相关DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK; IC50值4.75μM)具有相对弱的抑制活性。在使用细胞裂解物的mTOR激酶免疫沉淀测定中,Pilaralisib(XL147)不抑制针对生理底物蛋白真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1; IC50>15μM)的mTOR活性。与其对纯化的PI3K蛋白的抑制活性一致,Pilaralisib(XL147)在无血清培养基中抑制EGF诱导的PC-3和MCF7细胞中PIP3的产生,IC50分别为220和347nM。 Pilaralisib(XL147)抑制PI3K下游关键信号蛋白磷酸化的能力通过评估其对EGF刺激的AKT磷酸化的影响以及基于细胞的无血清培养基中PC-3细胞中S6的非刺激磷酸化来检测ELISA。 Pilaralisib(XL147)抑制这些活性,IC50分别为477和776 nM [1]。

在10,30,100或300mg/kg的单次口服剂量后,检查Pilaralisib(XL147)抑制AKT,p70S6K和S6的这种内源性磷酸化的能力。在给药后4,24或48小时收获肿瘤并在裂解缓冲液中匀浆。然后合并来自每只动物(n = 4)的肿瘤裂解物,并通过Western免疫印迹分析总的和磷酸化的AKT,p70S6K和S6的水平。 Pilaralisib(XL147)的施用引起肿瘤中AKT,p70S6K和S6磷酸化的剂量依赖性降低,在4小时时达到最大81％的AKT磷酸化抑制,300mg/kg。来自4小时时间点的剂量-反应关系预测在约100 mg/kg(pAKTT308),54 mg/kg(pAKTS473),71 mg/kg剂量的剂量下,AKT,p70S6K和S6磷酸化的50％抑制( p-p70S6K)和103mg/kg(pS6)。在100mg/kg剂量的Pilaralisib(XL147)后,MCF7肿瘤中AKT,p70S6K和S6磷酸化的抑制在4小时时最大,达到55％至75％;然而,在24小时内抑制水平降低至8％至45％,并且在48小时内仅有极小或没有抑制作用。在300mg/kg剂量的Pilaralisib(XL147)后,抑制在4小时时也是最大的(65％-81％)。然而,与100 mg/kg剂量相比,24小时(51％-78％)的抑制几乎与4小时时的抑制相当,并且部分抑制(25％-51％)持续48小时[1] 。

将MCF7人乳腺癌细胞和PC-3人前列腺腺癌细胞维持在37℃，5％CO 2的培养条件下。对于EGF处理后的PI3K途径状态评估，将培养基替换为溶解在含有0.3％DMSO的无血清DMEM中的测试化合物。温育3小时后，用100ng / mL EGF刺激细胞10分钟，并进行细胞裂解物的Western免疫印迹分析。进行Ramos细胞中mTOR途径状态的评估。使用Cell Proliferation ELISA，bromodeoxyuridine（BrdUrd）化学发光试剂盒评估细胞增殖。进行细胞毒性，细胞凋亡（半胱天冬酶-3/7），不依赖贴壁的生长和PC-3细胞迁移测定。评估肝细胞生长因子（HGF）诱导的趋化性。进行内皮细胞管形成测定，稍作修改。使用Image Pro Plus软件[1]量化总管长度。

小鼠[1]使用雌性无胸腺裸鼠和雄性裸鼠。培养肿瘤细胞并在小鼠中建立为异种移植物，并评估体重和肿瘤重量。使用双尾学生t检验确定统计学显着性（显着性定义为P <0.05）。将Pilaralisib（XL147）配制在无菌水/ 10mmol / L HCl或水中，并以指定剂量和方案通过口服管饲法以10mL / kg的剂量体积施用。

[1]. Foster P, et al. The Selective PI3K Inhibitor XL147 (SAR245408) Inhibits Tumor Growth and Survival and Potentiates the Activity of Chemotherapeutic Agents in Preclinical Tumor Models. Mol Cancer Ther. 2015 Apr;14(4):931-40.

3-甲基腺嘌呤 | LY294002 | 渥曼青霉素 | Alpelisib (BYL719) | 5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺 | IPI549 | 2-氨基-N-[2,3-二氢-7-甲氧基-8-[3-(4-吗啉基)丙氧基]咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基]-5-嘧啶甲酰胺 | 艾代拉里斯 | Dactolisib (BEZ235) | 槲皮素 | SAR405 | 2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)-1-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-D]嘧啶 | 740 Y-P | LY3023414 | 1,3-二咖啡酰奎宁酸