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5-[2-[(2R,6S)-2,6-二甲基-4-吗啉基]-4-(4-吗啉基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-2-甲氧基苯甲醇

用途

KU-0063794 是一种有效的,特异性的 mTOR 抑制剂,能够抑制 mTORC1 和 mTORC2,IC50 值均约为 10 nM。

名称

[ CAS 号 ]:
938440-64-3

[ 中文名 ]:
5-[2-[(2R,6S)-2,6-二甲基-4-吗啉基]-4-(4-吗啉基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-2-甲氧基苯甲醇

[ 英文名 ]:
KU-0063794

[中文别名 ]:

依托泊苷

[英文别名 ]:

KU-0063794
ku 0063794
KU0063794

生物活性

[ 描述 ]:

KU-0063794 是一种有效的,特异性的 mTOR 抑制剂,能够抑制 mTORC1 和 mTORC2,IC50 值均约为 10 nM。

[ 相关类别 ]:

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

mTORC1:10 nM (IC50)

mTORC2:10 nM (IC50)

[体外研究]

Ku-0063794是细胞渗透物,抑制Akt,S6K和SGK的活化和疏水基序磷酸化,但不抑制RSK(核糖体S6激酶),一种不受mTOR调节的AGC激酶。 Ku-0063794还抑制由PDK1(3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1)磷酸化的Akt的T环Thr308残基的磷酸化。 Ku-0063794诱导mTORC1底物4E-BP1(真核起始因子4E结合蛋白1)的去磷酸化比雷帕霉素大得多,即使在mTORC2缺陷细胞中,表明mTOR的形式不同于mTORC1,或mTORC2磷酸化4E-BP1 。 Ku-0063794还抑制细胞生长并诱导G1期细胞周期停滞[1]。 Ku0063794不改变LNCaP细胞核中的核磷酸-Mst1-Thr-120水平,而Ku0063794或CCI-779增加C4-2细胞核中的磷酸-Mst1-Thr-120水平[2]。 GDC-0941和KU0063794的组合抑制4EBP1和S6的磷酸化程度与HCT116,DLD1和HT29细胞系中单一药剂NVP-BEZ235引起的磷酸化程度相似[3]。

[激酶实验]

在Hepes裂解缓冲液中新鲜裂解HEK-293细胞。通过与缀合至免疫前IgG的5-20μL蛋白G-Sepharose一起温育来裂解裂解物（1-4mg）。然后将裂解物提取物与5-20μL缀合至5-20μg的抗Rictor或抗Raptor抗体或免疫前IgG的蛋白G-Sepharose一起温育。所有抗体与蛋白G-Sepharose共价缀合。免疫沉淀在4℃下在振动平台上进行1小时。用Hepes裂解缓冲液洗涤免疫沉淀物四次，然后用Hepes激酶缓冲液洗涤两次。对于用于磷酸化S6K1的Raptor免疫沉淀物，对于最初的两个洗涤步骤，缓冲液包含0.5mol / LNaCl以确保最佳的激酶活性。从用PI-103孵育的血清剥夺的HEK-293细胞（1μM，1小时）分离GST-Akt1。从用雷帕霉素（0.1μM，1小时）温育的血清剥夺的HEK-293细胞中纯化GST-S6K1。通过在各种浓度的KU-0063794和GST-Akt1（0.5μg）或GST-S6K1（0.5μg）存在下添加0.1mM ATP和10mM MgCl 2来启动mTOR反应。反应在30℃下在振动平台上进行30分钟，并通过加入SDS样品缓冲液终止反应。然后将反应混合物通过0.22-μM-孔径的Spin-X过滤器过滤，并将样品用指定的抗体进行电泳和免疫印迹分析。

[细胞实验]

用KU-0063794处理细胞24,48和72小时，并用新鲜溶解的KU-0063794每24小时更换培养基。为了测量细胞生长，用PBS洗涤细胞一次，并在PBS中的4％（v / v）多聚甲醛中固定15分钟。用水洗涤一次后，将细胞用0.1％结晶紫在10％乙醇中染色20分钟，并用水洗涤三次。用0.5mL 10％（v / v）乙酸（乙酸）从细胞中提取结晶紫20分钟。然后将洗脱液在水中1:10稀释，并定量590nm处的吸光度。为了评估细胞周期分布，通过胰蛋白酶消化收获细胞，在PBS中洗涤一次，并重悬于冰冷的水溶液中。 70％（v / v）乙醇。将细胞在PBS加1％（w / v）BSA中洗涤两次，并在含有50μg/ mL碘化丙锭和50μg/ mL RNase A的PBS加0.1％（v / v）Triton X-100中染色20分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件测定细胞的DNA含量。以线性标度获得红色荧光（585nm），并且使用脉冲宽度分析来排除双峰。使用FlowJo软件确定细胞周期分布。

[参考文献]

[1]. Garcia-Martinez et al. Ku-0063794 is a specific inhibitor of the mammalian target of rapamycin (mTOR). Biochem.J. (2009)421 29.

[2]. Collak FK, et al. Threonine-120 phosphorylation regulated by phosphoinositide-3-kinase/Akt and mammalian target of rapamycin pathway signaling limits the antitumor activity of mammalian sterile 20-like kinase 1.J Biol Chem. 2012 Jul 6;287(28):23698-709. E

[3]. Haagensen EJ, et al. The synergistic interaction of MEK and PI3K inhibitors is modulated by mTOR inhibition. Br J Cancer. 2012 Apr 10;106(8):1386-94.

[相关活性小分子]

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.2±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
694.3±65.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₂₅H₃₁N₅O₄

[ 分子量 ]:
465.545

[ 闪点 ]:
373.7±34.3 °C

[ 精确质量 ]:
465.237610

[ PSA ]:
93.07000

[ LogP ]:
0.27

[ 外观性状 ]:
white to beige

[ 蒸汽压 ]:
0.0±2.3 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.609

[ 储存条件 ]:
Store at RT

[ 水溶解性 ]:
DMSO: >2mg/mL (warmed)

MSDS

详细MSDS(安全技术说明书)

安全信息

[ 符号 ]:

GHS06

[ 信号词 ]:
Danger

[ 危害声明 ]:
H301

[ 警示性声明 ]:
P301 + P310

[ 危害码 (欧洲) ]:
T

[ 风险声明 (欧洲) ]:
25

[ 安全声明 (欧洲) ]:
45

[ 危险品运输编码 ]:
UN 2811 6.1 / PGIII

文献

Mechanistic target of rapamycin inhibition extends cellular lifespan in dendritic cells by preserving mitochondrial function.

J. Immunol. 193(6) , 2821-30, (2014)

TLR-mediated activation of dendritic cells (DCs) is associated with a metabolic transition in which mitochondrial oxidative phosphorylation is inhibited by endogenously synthesized NO and the cells be...

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