(5Z)-5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮

GSK1059615 是 PI3Kα/β/δ/γ 可逆的抑制剂,同时也抑制 mTOR,IC50 值分别为 0.4 nM/0.6 nM/2 nM/5 nM 和 12 nM。

研究领域 >> 癌症

PI3Kα:0.4 nM (IC50)

PI3Kβ:0.6 nM (IC50)

PI3Kδ:5 nM (IC50)

PI3Kγ:2 nM (IC50)

mTOR:12 nM (IC50)

GSK1059615抑制PI3Kα,β,γ和δ,Ki分别为0.42 nM,0.6 nM,0.47 nM和1.7 nM [1]。在T47D和BT474癌细胞中,GSK1059615在S473抑制Akt的磷酸化,IC50为40 nM [2]。

GSK1059615(25 mg/kg)有效抑制BT474或HCC1954乳腺癌细胞的异种移植小鼠模型中的肿瘤生长[1]。

使用基于HTRF的PI3K概况分析测定试剂盒获得对PI3K的GSK1059615依赖性抑制的测量。在PI3Kα和δ测定中使用400pM酶，在PI3Kβ测定中使用200pM，在PI3Kγ测定中使用1nM。此外，PI3Kα，β和δ测定用150mM NaCl和100μMATP进行，而PI3Kγ测定在没有NaCl和15μMATP的情况下进行。所有反应均在10μMPIP2下进行。将GSK1059615连续稀释（在DMSO中3倍），并将50nL转移至384孔低容量测定板。通过用去离子水稀释原液1：4来制备PI3K反应缓冲液。在使用当天加入新制备的DTT，终浓度为5mM。通过在反应缓冲液中加入2.5μLPI3K引发酶添加和GSK1059615预孵育。将板在室温下孵育15分钟。通过添加2.5μL的2x底物溶液（PIP2和ATP在1x反应缓冲液中）引发反应。将板在室温下温育1小时。通过添加2.5μL终止溶液来淬灭反应。然后通过添加2.5μL检测溶液处理猝灭反应以检测产物形成。在黑暗中孵育1小时后，在Envision读板仪上测量HTRF信号，用于330nm激发和620nm（Eu）和665nm（APC）的双发射检测。然后获得IC 50值。

将细胞以每孔1×10 4个细胞的密度平板置于透明平底96孔板中并孵育过夜。然后，加入GSK1059615并将板孵育30分钟。在孵育结束时，从平板吸出培养基，并用冷PBS洗涤平板一次。向每个孔中加入80μLMSD裂解缓冲液，将板在振荡器上于4℃温育至少30分钟。对于Akt双链体测定，将板用200μL/孔洗涤缓冲液洗涤4次，并用纸巾轻拍以进行印迹。然后，向每个孔中加入60μL裂解物，将板在室温下在振荡器上孵育1小时。再洗涤4次后，加入抗体（每孔25μL），将板在振荡器上孵育1小时并再次洗涤。最后，添加读缓冲液（每孔150μL）并立即读取板。然后获得IC 50值。

[1]. Carnero A. Novel inhibitors of the PI3K family. Expert Opin Investig Drugs. 2009 Sep;18(9):1265-77.

[2]. Maira SM, et al. From the bench to the bed side: PI3K pathway inhibitors in clinical development. Curr Top Microbiol Immunol, 2010, 347, 209-239.

[3]. Takashi Kei Kishimoto, et al. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses. US 20160074531 A1.

雷帕霉素 | 3-甲基腺嘌呤 | LY294002 | 渥曼青霉素 | Alpelisib (BYL719) | Torin 1 | 5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺 | IPI549 | MHY1485 | 沙帕色替 | AZD8055 | 2-氨基-N-[2,3-二氢-7-甲氧基-8-[3-(4-吗啉基)丙氧基]咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基]-5-嘧啶甲酰胺 | 艾代拉里斯 | Dactolisib (BEZ235) | 槲皮素