302803-72-1

• 常用中文名：HPI-4 (Ciliobrevin A)
• 常用英文名：Ciliobrevin A
• CAS号：302803-72-1
• 分子式：C₁₇H₉Cl₂N₃O₂
• 分子量：358.17800
• 相关类别： 信号通路 干细胞及 Wnt 通路 Hedgehog
• 发布时间：2016-08-18 03:43:32
• 更新时间：2024-01-02 20:13:12
• Ciliobrevin A 是一种 Hedgehog (Hh) 信号通路抑制剂，平均抑制浓度 (₅₀) 值小于 10 μM。

名称

• 中文名: Ciliobrevin A.
• 英文名: 3-(2,4-dichiorophenyl)-3-oxo-2-(4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2(1H)ylidene)propanenitrile
• 英文别名: Ciliobrevin A; HPI-4

物化性质

• 分子式: C₁₇H₉Cl₂N₃O₂
• 分子量: 358.17800
• 精确质量: 357.00700
• PSA: 89.51000
• LogP: 3.00128
• 外观性状: 粉末
• 储存条件: -20℃

生物活性

• 描述: Ciliobrevin A 是一种 Hedgehog (Hh) 信号通路抑制剂,平均抑制浓度 (50) 值小于 10 μM。
• 相关类别:
  信号通路 >> 干细胞及 Wnt 通路 >> Hedgehog
  研究领域 >> 癌症
• 靶点:

  IC50: <10 μM (Hedgehog)[1]

• 体外研究: Ciliobrevin A(HPI-4)也可以防止Shh刺激后FLAG-Gli2全长/阻遏物比率增加,但HPI-2和HPI-3没有显着影响。 Ciliobrevin A降低了这些细胞中FLAG-Gli1的稳定性,揭示了这种小分子可以抑制Hh靶基因表达的另一种机制,而HPI-2或HPI-3对FLAG-Gli1水平都没有任何显着影响。 Ciliobrevin A以与其对总FLAG-Gli2水平的影响不成比例的方式增加FLAG-Gli2的纤毛水平。此外,用Ciliobrevin A培养的Shh-EGFPFLAG-Gli2细胞具有截短的初级纤毛,并且在显着部分的Ciliobrevin A处理的细胞中不存在该细胞器。 Ciliobrevin A还扰乱Shh-LIGHT2FLAG-Gli1细胞中的初级纤毛形成,并促进FLAG-Gli1在该细胞器远端的积聚。通过组蛋白H3磷酸化(pH3)水平测量,Ciliobrevin A显着抑制这些神经元祖细胞的增殖,并降低CGNP中细胞周期蛋白D1蛋白和Gli1,Gli2和N-Myc转录物的细胞水平。 Ciliobrevin A可以阻断表达SmoM2的CGNPs的增殖,并且对于缺乏Su(fu)功能的CGNPs应该同样有效,而Smo抑制剂Cyclopamine对任何致癌病变均无效[1]。
• 激酶实验: 使用基于CMV启动子的含有SV40起点的Smo-Myc3表达构建体（在C末端含有三个连续Myc表位的鼠Smo），用BODIPY-环巴胺和Smo过表达HEK 293T细胞进行Smo结合测定。将HEK 293T细胞接种到8孔腔盖玻片（80,000细胞/孔）中，并在含有10％FBS，100U / mL青霉素和0.1mg / mL链霉素的DMEM中培养。培养细胞直至它们达到55-65％汇合（14-18h），之后用Smo-Myc3表达构建体和Transit-LT1转染它们。转染后24小时，用PBS洗涤细胞，并在含有0.5％FBS，5nM BODIPY-环巴胺和各种浓度的环巴胺或单个HPI的DMEM中培养。 30分钟后，向每个孔中加入10μMHoescht33342，并将HPI与细胞一起温育另外30分钟。然后用PBS缓冲液洗涤细胞两次，用含有0.5％FBS的无酚红DMEM洗涤一次，并立即使用DMI6000B复合显微镜成像。使用具有75像素的滚球尺寸的ImageJ软件对图像进行背景减去，然后使用Metamorph软件确定BODIPY-环巴胺强度。将直径为300像素的圆形区域放置在包含均匀汇合的细胞的区域上，并且使用来自四个独立图像的大约20个区域的像素强度来确定每个实验条件的平均BODIPY-环巴胺水平[1]。
• 细胞实验: 将NIH 3T3细胞接种到含有聚D-赖氨酸包被的12-mm玻璃盖玻片的24孔板（40,000细胞/孔）中，并在含有10％CS，100U / mL青霉素和0.1mg / mL链霉素的DMEM中培养，直至它们达到85-90％的融合度。将培养基更换为含有0.5％CS，100U / mL青霉素和0.1mg / mL链霉素的DMEM，并将细胞再培养12小时。然后用DMSO，3μM环巴胺，15μMHPI-1,20μMHPI-2,30μMHPI-3或30μMCiliobrevinA处理细胞。将Shh-N条件培养基加入适当的孔中。最终浓度为5％。 12小时后，将细胞在室温下在4％多聚甲醛中固定10分钟，用PBS洗涤三次，用含有0.1％Triton X-100的PBS透化1分钟，再用PBS洗涤三次，然后用PBS封闭。含有1％正常山羊血清的PBS 3小时。然后将盖玻片用小鼠抗N-乙酰化-α-微管蛋白（在封闭缓冲液中1：1,000）和兔抗Smo抗体（6）（在封闭缓冲液中1：2,000稀释）在室温下处理2小时并洗涤用PBS 3×5分钟。接下来将盖玻片与Alexa Fluor 594-缀合的山羊抗小鼠IgG和Alexa Fluor 488-缀合的驴抗兔IgG抗体（在封闭缓冲液中1：1,000稀释）在室温下孵育1小时。用PBS洗涤并用4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）孵育5分钟后，使用Prolong Gold固定样品，并用倒置的Leica DMIRE2激光扫描共聚焦显微镜成像[1]。
• 参考文献:

  [1]. Hyman JM, et al. Small-molecule inhibitors reveal multiple strategies for Hedgehog pathway blockade. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009 Aug 18;106(33):14132-7.

安全

• 符号: GHS07, GHS09
• 信号词: Warning
• 危害声明: H302-H410
• 警示性声明: P273-P501
• 危险品运输编码: UN 3077 9 / PGIII