描述 |
MS436 是一种 bromodomain 抑制剂,有效作用于 BRD4 BrD1,Ki 为 30-50 nM,比作用于 BrD2 选择性高 10 倍。
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相关类别 |
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靶点 |
Ki: 30-50 nM (BRD4 bromodomain)[1]
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体外研究 |
通过一组水介导的相互作用,MS436表现出低纳摩尔亲和力(估计的Ki为30-50nM),优先于第一溴结构域。 MS436有效抑制小鼠巨噬细胞中NF-κB指导的NO和促炎细胞因子白细胞介素-6产生中的BRD4活性。 MS436代表一类新的溴结构域抑制剂,将有助于进一步研究BRD4的两个溴结构域在基因表达中的生物学功能。 MS436表现出对BRD4 BrD1的估计Ki = 30-50 nM的有效亲和力和对BrD2的10倍选择性,这是通过一组独特的水介导的分子间相互作用实现的[1]。
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激酶实验 |
使用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的MS417作为测定探针,在荧光各向异性竞争测定中评估新合成的重氮苯化合物(例如,MS436)对各种溴代维生素的结合亲和力。用BrD蛋白(0.25-1μM)和荧光探针(80nM)进行竞争实验,并在PBS缓冲液(pH7.4)中增加浓度的未标记竞争配体,总体积为80μL。用Safire 2酶标仪在25℃下孵育荧光配体和蛋白质一小时。在竞争结合测定中,荧光配体浓度≤2Kd,并且蛋白质浓度设定为结合50-80%的荧光配体。通过对Nicolovska-Coleska及其同事介绍的Cheng-Prussoff方程的校正来计算竞争配体的解离常数。假设单点竞争绑定模型,用于从IC50值计算Ki的等式[1]。
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细胞实验 |
将小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞以每孔1×10 4个细胞的密度接种在96孔板中,并在37℃下孵育18小时。然后将细胞用重氮苯溴结构域抑制剂(例如,MS436)处理至高达100μM,持续24小时。在24小时温育结束时,向每个孔中加入10μLMTT溶液(4mg / mL)并在37℃下孵育4小时。然后除去上清液,将细胞溶解在100μL的100%DMSO中。首先将重氮苯化合物溶解在DMSO中,然后用培养基稀释至浓度范围为0.28-50000nM。将DMSO的最终浓度调节至0.05%(v / v)。使用EnVison 2104 Multilabel Reader [1]通过570 / 630nm处的吸光度测量还原程度。
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参考文献 |
[1]. Zhang G, et al. Structure-Guided Design of Potent Diazobenzene Inhibitors for the BET Bromodomains. J Med Chem. 2013 Nov 27;56(22):9251-64.
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