| 描述 |
LY303511 是 LY294002 的一种结构类似物,但 LY303511 不抑制 PI3K。LY303511 可增强 SHEP-1 神经母细胞瘤细胞的TRAIL 敏感性。LY303511 可逆地阻断 MIN6 胰岛瘤细胞中的 K+ 电流 (IC50=64.6±9.1 μM)。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
TRAIL[2] IC50: 64.6±9.1 µM (K+ currents, in MIN6 insulinoma cells)[3]
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| 体外研究 |
LY303511在结构上与LY294002相同,除了在吗啉环中取代-O代表-NH,并且不能有效抑制PI3K。用LY303511处理细胞导致钙黄绿素扩散的增加类似于LY294002的水平。 LY303511增加间隙连接细胞间通讯(GJIC)的能力不会与通过免疫印迹测量的AKT磷酸化抑制同时发生[1]。 LY303511通过H2O2-MAPK活化和死亡受体的上调增强SHEP-1神经母细胞瘤细胞的TRAIL敏感性。将SHEP-1细胞暴露于不同浓度的LY303511(LY30),TRAIL和两者的组合(与LY303511预孵育1小时,然后TRAIL孵育4小时)。 SHEP-1细胞对TRAIL有反应(分别在25,50和100ng/mL时存活分数减少~10％,~15％和~30％);然而,用LY303511(12.5,25或50μM)处理对细胞活力没有影响。然而,将细胞与LY303511(25μM)孵育1小时,然后暴露于50 ng/mL TRAIL 4小时具有强烈的协同效应(LY303511 + TRAIL活细胞减少约40％,而单独使用TRAIL则减少约15％ )[2]。 LY303511是关于PI3K活性的阴性对照化合物。在MIN6胰岛素瘤细胞中,Wortmannin(100 nM)对全细胞向外K +电流没有影响,但LY294002和LY303511以剂量依赖性方式可逆地阻断电流(IC50分别为9.0±0.7μM和64.6±9.1μM)。 Kv2.1和Kv1.4在β细胞中高度表达,并且在Kv2.1转染的tsA201细胞中,50μMLY294002和100μMLY303511分别可逆地抑制电流99％和41％。 LY303511阻断电流,IC50为64.6±9.1μM,在500μM时最大抑制率为~90％(每种浓度n≥5个细胞)[3]。
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| 体内研究 |
当肿瘤达到约150mm 3的体积时,进行载体或LY303511(10mg/kg /天)的腹膜内给药,此时35只小鼠已形成肿瘤。 21天后,> 15％的小鼠由于肿瘤过度生长而需要安乐死,并且由于对平均肿瘤体积的估计不可靠而对这些数据进行检查。 LY303511的施用,10mg/kg /天,足以抑制体内PC-3肿瘤的生长[4]。
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| 细胞实验 |
将人神经母细胞瘤SHEP-1细胞维持在补充有10％胎牛血清和1％青霉素的DMEM中。在典型的存活测定中，将在24孔板中铺板24小时的SHEP-1细胞（每孔8×104）暴露于LY303511（12.5,25和50μM），TRAIL（25,50和100ng / mL）和两者的组合（1小时与LY303511预孵育，然后TRAIL预孵育4小时）。通过结晶紫测定确定细胞毒性。药物暴露后，用PBS洗涤细胞，并用结晶紫溶液（200μL）孵育20分钟。用蒸馏水洗去过量的结晶紫溶液，剩余的晶体用20％乙酸溶解。使用自动ELISA读数器通过595nm波长处的吸光度确定活力。细胞活力实验与2,000单位/ mL过氧化氢酶，4μMJNK抑制剂SP600125,10μMP38抑制剂SB202190,20μMMAPK/ ERK激酶（MEK）抑制剂PD98059,50μM半胱天冬酶-8抑制剂Z-IETD-FMK类似地进行或泛半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK，或死亡受体阻断抗体（4μg/ mL抗DR4或1μg/ mL抗DR5），或用转染小干扰RNA（siRNA）的细胞沉默JNK和ERK表达，分别。在添加TRAIL之前，将细胞与LY303511和相应的抑制剂或过氧化氢酶预孵育1小时。 LY303511对TRAIL诱导的细胞凋亡的类似致敏作用是用SY5Y神经母细胞瘤，T98G胶质母细胞瘤，Jurkat白血病，CEM髓性白血病，HeLa卵巢癌和HT29结直肠癌细胞系[2]进行的。
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| 动物实验 |
小鼠[4]人体前列腺腺癌（PC-3）细胞（ATCC CRL-1435）在体外培养，然后通过在侧腹皮下注射，在每个无胸腺NCR裸鼠的20％基质胶中收获和植入1×10 6个细胞。将接种的小鼠再分为4组。当肿瘤达到~150mm 3（n = 35）时，开始给予载体或LY303511（10mg / kg /天）（第1天），并且在30天时测量肿瘤体积30天。指定的时间点。
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| 参考文献 |
[1]. Bodenstine TM, et al. Homotypic gap junctional communication associated with metastasis suppression increases with PKA activity and is unaffected by PI3K inhibition. Cancer Res. 2010 Dec 1;70(23):10002-11. [2]. Shenoy K, et al. LY303511 enhances TRAIL sensitivity of SHEP-1 neuroblastoma cells via hydrogen peroxide-mediated mitogen-activated protein kinase activation and up-regulation of death receptors. Cancer Res. 2009 Mar 1;69(5):1941-50. [3]. El-Kholy W, Macdonald PE, Lin JH, The phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor LY294002 potently blocks K(V) currents via a direct mechanism. FASEB J. 2003 Apr;17(6):720-2. [4]. Kristof AS, et al. LY303511 (2-piperazinyl-8-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one) acts via phosphatidylinositol 3-kinase-independent pathways to inhibit cell proliferation via mammalian target of rapamycin (mTOR)- and non-mTOR-dependent mechanisms. J Pharmacol Exp Ther. 2005 Sep;314(3):1134-43.
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