描述 |
BAM 15 是一种新型的线粒体质子载体解偶联剂。
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相关类别 |
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体外研究 |
BAM 15能够在不增加ROS的情况下在广泛的剂量范围内增加O 2消耗。 BAM 15和FCCP在结构上不相关,并且观察到从100nM到1μM的低剂量BAM 15将细胞O 2消耗速率(OCR)增加到与FCCP类似的程度,但是从1μM到50μM的更高浓度显示BAM图15的实施例能够在一系列细胞系中以高速率维持未偶联的呼吸。 BAM15完全能够在寡霉素存在下增加线粒体呼吸,并且在成肌细胞和肝细胞中比FCCP具有更宽的浓度范围。 BAM15诱导线粒体肿胀,证明BAM15是质子载体。当在高达50μM的广泛剂量范围内给药时,BAM15处理的细胞比FCCP处理的细胞更可行[1]。
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体内研究 |
与载体处理的小鼠相比,接受BAM15的动物免受肾损伤,如缺血后24小时和48小时血浆肌酐水平降低,肾小管坏死减少,刷状缘绒毛消耗减少,近端小管梗阻减少,免疫细胞浸润较少[1]。
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激酶实验 |
进行电子流动测定。简而言之,将MAS中的5μg线粒体蛋白加载到24孔组织培养板中,并在4℃下以2000×g离心15分钟。在测定之前,将线粒体在含有10mM丙酮酸,2mM苹果酸和5μMBAM15或FCCP的MAS中于37℃温育10分钟。依次加入鱼藤酮(2μM),琥珀酸盐(10mM),抗霉素A(4μM)和N,N,N',N'-四甲基 - 对苯二胺(TMPD,100μM)加抗坏血酸盐(10mM)如图所示。 N = 3个孔/板,代表3个板[1]。
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细胞实验 |
将L6细胞与线粒体膜电位四甲基罗丹明(TMRM,125nM)或DMSO(1%)对照的荧光指示剂一起温育30分钟。然后将细胞以700×g离心5分钟,并以1×10 5个细胞/ mL的浓度重悬于无缓冲的DMEM中。然后在流式细胞术分析之前用BAM15或DMSO(0.1%)处理细胞10分钟[1]。
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动物实验 |
雄性小鼠(8周龄,C57BL / 6)用氯胺酮(120mg / kg),甲苯噻嗪(12mg / kg)和阿托品(0.324mg / kg)的混合物(ip)麻醉并进行双侧缺血再灌注损伤(缺血26分钟,再灌注24小时或48小时)。在手术过程中,用加热垫将小鼠核心温度维持在34至36℃;在恢复和再灌注期间,将小鼠圈养在温度恒定的培养箱中,环境温度为30至32℃。对照,假手术小鼠经历类似的程序,但肾蒂不被夹住。在肾IR之前1小时腹膜内注射1或5mg / kg的BAM15小鼠。载体小鼠也注射相同的溶液BAM 15用(3%DMSO在50%PEG400中)制备[1]。
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参考文献 |
[1]. Kenwood BM, et al. Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarize the plasma membrane. Mol Metab. 2013 Nov 28;3(2):114-23.
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