| 描述 |
AST 487 是一种 RET 激酶抑制剂,IC50 为 880 nM,抑制 RET 自磷酸化,及下游效应器激活,也抑制 Flt-3,IC50 为 520 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 880 nM (RET), 170 nM (KDR), 790 nM (Flt-4), 500 nM (c-Kit), 520 nM (Flt-3), 20 nM (Abl)[1]
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| 体外研究 |
AST 487(NVP-AST487)在体外激酶检测中也同样抑制了许多其他激酶,包括KDR(IC50 = 170 nM),Flt-4(IC50 = 790 nM),Flt-3(IC50 = 520) nM),c-Kit(IC50 = 500nM)和c-Abl(IC50 = 20nM)。 AST 487通过RET的活化突变有效抑制人甲状腺癌细胞系的生长,但没有RET突变的细胞系。 GDNF /GFRα1和persephin诱导的降钙素mRNA均与MTC-M细胞中100 nM的AST 487共孵育显着抑制[1]。 AST 487是一种新型的突变型FLT3抑制剂。在生化测定中测试AST 487对Flt-3激酶活性的抑制。 Ki确定为0.12μM。除Flt-3外,NVP-AST487抑制RET,KDR,c-Kit和c-Abl激酶,IC50值低于1μM。用AST 487处理FLT3-ITD-Ba/F3细胞和D835Y-Ba/F3细胞有效抑制细胞增殖(IC50 <5nM)。 AST 487用0.01μMAST487处理FLT3-ITD-Ba/F3细胞导致完全细胞杀伤,相比之下,相同浓度的AML患者样品杀死率约为50％[2]。
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| 体内研究 |
在向OF1小鼠单次口服施用15mg/kg AST 487后,0.5小时后达到0.505±0.078μMSE的平均峰值血浆水平(C max)。在口服给药后6小时,在小鼠血浆中发现相似水平的AST 487,24小时时Clast为21±4nM。口服生物利用度计算为9.7％,t1/2末端消除1.5小时[1]。
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| 激酶实验 |
谷胱甘肽S-转移酶（GST） - 融合的激酶结构域在杆状病毒中表达并在谷胱甘肽 - 琼脂糖凝胶上纯化。通过在放射性标记的ATP存在下通过各蛋白激酶的纯化的GST-融合激酶结构域测量合成底物[poly（Glu，Tyr）]的磷酸化来测试激酶活性;使用的ATP浓度在各个激酶的Km范围内优化。简言之，将每种激酶在优化的缓冲条件下在20mM Tris-HCl（pH 7.5），1至3mM MnCl 2,3至10mM MgCl2,10μMNa3 VO 4,1mM DTT，0.2μCi[33P]中孵育。在存在或不存在NVP-AST487的情况下，ATP，1至8μMATP，3至8μg/ mL聚（Glu / Tyr，4：1）和1％DMSO，总体积为30μL在环境温度下最小。加入10μL250mMEDTA终止反应，将反应混合物转移到Immobilon聚偏二氟乙烯膜上。洗涤过滤器（0.5％H 3 PO 4），浸泡在乙醇中，干燥并在液体闪烁计数器中计数。 AST 487的IC50通过抑制百分比的线性回归分析计算[1]。
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| 细胞实验 |
台盼蓝排除法用于测定在存在和不存在NVP-AST 487的情况下培养的细胞的增殖。细胞存活率报告为对照（未处理）细胞的百分比，数据表示为2次独立实验的平均值，除了如有指示。误差线表示每个数据点的平均值的标准误差。使用膜联蛋白-V-Fluos染色试剂盒测量药物处理细胞的细胞凋亡。进行细胞周期分析[2]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]将雌性无胸腺裸鼠保持在优化的卫生条件下（每个模克隆III型笼最多10只小鼠），可自由获取食物和水。通过分别在每只小鼠100μLHBSS中皮下注射1×106和5×106的NIH3T3-RETC634W和TT细胞建立肿瘤。可治疗的肿瘤，即平均肿瘤体积为100mm 3，在NIH3T3-RETC634W细胞注射的10天内和TT细胞注射的20天内发展。通过强饲法每天一次给予NVP-AST487。通过将适量的粉末溶解在N-甲基吡咯烷酮/ PEG300（1：10v / v）中来配制化合物。将小鼠随机分成四个治疗组，每组八只小鼠。前三组分别每天口服50,30和10mg / kg的NVP-AST487，持续3周。第四组接受车辆治疗。每周两次监测肿瘤生长和体重。肿瘤体积根据公式确定：长度×直径2×π/ 6。在最后一次给药后6小时，在功效研究结束时收集肿瘤并在液氮中冷冻。
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| 参考文献 |
[1]. Akeno-Stuart N, et al. The RET Kinase Inhibitor NVP-AST487 Blocks Growth and Calcitonin Gene Expression through Distinct Mechanisms in Medullary Thyroid Cancer Cells. Cancer Res. 2007 Jul 15;67(14):6956-64. [2]. Weisberg E, et al. Antileukemic effects of the novel, mutant FLT3 inhibitor NVP-AST487: effects on PKC412-sensitive and -resistant FLT3-expressing cells. Blood. 2008 Dec 15;112(13):5161-70.
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