比瑞那帕的作用 - 生物活性 - 靶点活性
发布时间：2018-11-19 20:10:23 编辑作者：活性达人
图片：比瑞那帕结构式
比瑞那帕是一种合成的小分子，既是第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂（SMAC）的肽模拟物，也是IAP（凋亡蛋白抑制剂）家族蛋白的抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍比瑞那帕的生物活性：
1）体外活性
比瑞那帕引起cIAP1和2的显着降解。在处理4小时内，比瑞那帕 + TRAIL处理的细胞显示活性caspase-8和caspase-3水平以及PARP裂解超过单一药物，表明凋亡介导的细胞死亡。比瑞那帕以剂量依赖性方式显着降低SUM190细胞的活力。
在XIAP敲低细胞系（SUM190 shXIAP）中的比瑞那帕处理导致在较低剂量（30-300nM）下整体降低活力[1]。比瑞那帕在敏感细胞中引起细胞凋亡。比瑞那帕与TNF-α结合，导致451Lu和WM1366细胞系PARP裂解[2]。比瑞那帕诱导HCT116人结肠癌和MDA-MB-231人乳腺癌细胞中caspase-3活化的时间过程[3]。
2）体内活性
比瑞那帕可抑制黑色素瘤异种移植模型中的肿瘤生长。在相同肿瘤的活组织检查中活化的胱天蛋白酶-3染色显示在比瑞那帕处理的动物中凋亡细胞适度增加[2]。比瑞那帕（15 mg / kg，i.p。）诱导HCT116荷瘤小鼠细胞凋亡[3]。
我们已经了解了比瑞那帕的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
每只10只动物接种皮下。在基质胶/完全培养基的悬浮液中以1：1的比例使用1×106 451Lu或1205Lu人黑素瘤细胞。在形成可触知的肿瘤后，将来自两种肿瘤模型的小鼠随机分成两组。两组均用载体对照或比瑞那帕30mg/kg腹膜内注射三次/周，持续21天。将比瑞那帕溶于蒸馏水中的12.5％Captisol中。通过卡尺测量每周评估肿瘤大小两次。随后，分别以451Lu和1205Lu肿瘤细胞以相同的方式接种10只和15只小鼠的卫星组。在肿瘤达到200mm 3的平均体积后，如上所述给动物服用比瑞那帕或载体对照。在48小时和两个剂量后，处死动物并在最后一次处理后的四个时间点收获肿瘤。将肿瘤样品在液氮中快速冷冻用于随后的蛋白质分析并保存为用于免疫组织化学的FFPE块。
2）细胞实验
如所述进行台盼蓝排除测定。将细胞以每孔7.5×10 4（SUM149）或1.5×105（SUM190）细胞接种于6孔板中，并使其粘附过夜。细胞用TRAIL（0-100 ng / mL），比瑞那帕（0-10,000 nM），GT13402（0-10,000 nM），TNF-α（50 ng / mL），TNF-α中和抗体（10μg/ mL）处理 ），泛半胱天冬酶抑制剂Q-VD-OPh（20μM），或所示的组合。所有处理均施用24小时，然后将细胞用胰蛋白酶消化并重悬于PBS中。接下来，将10μL细胞悬浮液加入到10μL0.4％台盼蓝中，并将10μL混合物加载到血细胞计数器上;计数细胞，记录活细胞数和死细胞数。
3）激酶实验
荧光偏振测定：使用荧光底物测定化合物对XIAP和cIAP1的结合亲和力，并报告为Kd值。最初，使用固定浓度的肽（5 nM）和滴定不同浓度的蛋白质测定荧光标记的修饰的Smac肽（AbuRPF-K（5-Fam）-NH2; FP pep-tide）的解离常数（Kd）。 （半对数稀释度为0.075-5μM）。通过使用GraphPad Prism的单位点结合模型的非线性最小二乘拟合产生剂量 - 反应曲线，其中在测定中使用5nM的FP肽和50nM的XIAP。将各种浓度的Smac模拟物（在半对数稀释中100-0.001μM）加入到FP肽：蛋白质二元复合物中，在室温下在100μL含有100mg / mL牛c的0.1M磷酸钾缓冲液（pH7.5）中15分钟。球蛋白。孵育后，使用485nm激发滤光器和520nm发射滤光器在多标记板读取器上测量极化值。
今天介绍了比瑞那帕的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，比瑞那帕是一种二价Smac模拟物，是XIAP和cIAP1的强效拮抗剂，Kd 值分别为45 nM和小于1 nM。它的靶点活性是cIAP1,<1nM(Kd)；XIAP,45nM(Kd)。
您可能想了解比瑞那帕的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/1260251-31-7_535001.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Allensworth JL, et al. Smac mimetic Birinapant induces apoptosis and enhances TRAIL potency in inflammatory breast cancer cells in an IAP-dependent and TNF-α-independent mechanism. Breast Cancer Res Treat. 2013 Jan;137(2):359-71.
[2]. Krepler C, et al. The novel SMAC mimetic birinapant exhibits potent activity against human melanoma cells. Clin Cancer Res. 2013 Apr 1;19(7):1784-94.
[3]. Nguyen QD, et al. Temporal and spatial evolution of therapy-induced tumor apoptosis detected by caspase-3-selective molecular imaging. Clin Cancer Res. 2013 Jul 15;19(14):3914-24.
首先我们介绍比瑞那帕的生物活性：
1）体外活性
比瑞那帕引起cIAP1和2的显着降解。在处理4小时内，比瑞那帕 + TRAIL处理的细胞显示活性caspase-8和caspase-3水平以及PARP裂解超过单一药物，表明凋亡介导的细胞死亡。比瑞那帕以剂量依赖性方式显着降低SUM190细胞的活力。
在XIAP敲低细胞系（SUM190 shXIAP）中的比瑞那帕处理导致在较低剂量（30-300nM）下整体降低活力[1]。比瑞那帕在敏感细胞中引起细胞凋亡。比瑞那帕与TNF-α结合，导致451Lu和WM1366细胞系PARP裂解[2]。比瑞那帕诱导HCT116人结肠癌和MDA-MB-231人乳腺癌细胞中caspase-3活化的时间过程[3]。
2）体内活性
比瑞那帕可抑制黑色素瘤异种移植模型中的肿瘤生长。在相同肿瘤的活组织检查中活化的胱天蛋白酶-3染色显示在比瑞那帕处理的动物中凋亡细胞适度增加[2]。比瑞那帕（15 mg / kg，i.p。）诱导HCT116荷瘤小鼠细胞凋亡[3]。
我们已经了解了比瑞那帕的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
每只10只动物接种皮下。在基质胶/完全培养基的悬浮液中以1：1的比例使用1×106 451Lu或1205Lu人黑素瘤细胞。在形成可触知的肿瘤后，将来自两种肿瘤模型的小鼠随机分成两组。两组均用载体对照或比瑞那帕30mg/kg腹膜内注射三次/周，持续21天。将比瑞那帕溶于蒸馏水中的12.5％Captisol中。通过卡尺测量每周评估肿瘤大小两次。随后，分别以451Lu和1205Lu肿瘤细胞以相同的方式接种10只和15只小鼠的卫星组。在肿瘤达到200mm 3的平均体积后，如上所述给动物服用比瑞那帕或载体对照。在48小时和两个剂量后，处死动物并在最后一次处理后的四个时间点收获肿瘤。将肿瘤样品在液氮中快速冷冻用于随后的蛋白质分析并保存为用于免疫组织化学的FFPE块。
2）细胞实验
如所述进行台盼蓝排除测定。将细胞以每孔7.5×10 4（SUM149）或1.5×105（SUM190）细胞接种于6孔板中，并使其粘附过夜。细胞用TRAIL（0-100 ng / mL），比瑞那帕（0-10,000 nM），GT13402（0-10,000 nM），TNF-α（50 ng / mL），TNF-α中和抗体（10μg/ mL）处理 ），泛半胱天冬酶抑制剂Q-VD-OPh（20μM），或所示的组合。所有处理均施用24小时，然后将细胞用胰蛋白酶消化并重悬于PBS中。接下来，将10μL细胞悬浮液加入到10μL0.4％台盼蓝中，并将10μL混合物加载到血细胞计数器上;计数细胞，记录活细胞数和死细胞数。
3）激酶实验
荧光偏振测定：使用荧光底物测定化合物对XIAP和cIAP1的结合亲和力，并报告为Kd值。最初，使用固定浓度的肽（5 nM）和滴定不同浓度的蛋白质测定荧光标记的修饰的Smac肽（AbuRPF-K（5-Fam）-NH2; FP pep-tide）的解离常数（Kd）。 （半对数稀释度为0.075-5μM）。通过使用GraphPad Prism的单位点结合模型的非线性最小二乘拟合产生剂量 - 反应曲线，其中在测定中使用5nM的FP肽和50nM的XIAP。将各种浓度的Smac模拟物（在半对数稀释中100-0.001μM）加入到FP肽：蛋白质二元复合物中，在室温下在100μL含有100mg / mL牛c的0.1M磷酸钾缓冲液（pH7.5）中15分钟。球蛋白。孵育后，使用485nm激发滤光器和520nm发射滤光器在多标记板读取器上测量极化值。
今天介绍了比瑞那帕的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，比瑞那帕是一种二价Smac模拟物，是XIAP和cIAP1的强效拮抗剂，Kd 值分别为45 nM和小于1 nM。它的靶点活性是cIAP1,<1nM(Kd)；XIAP,45nM(Kd)。
您可能想了解比瑞那帕的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/1260251-31-7_535001.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Allensworth JL, et al. Smac mimetic Birinapant induces apoptosis and enhances TRAIL potency in inflammatory breast cancer cells in an IAP-dependent and TNF-α-independent mechanism. Breast Cancer Res Treat. 2013 Jan;137(2):359-71.
[2]. Krepler C, et al. The novel SMAC mimetic birinapant exhibits potent activity against human melanoma cells. Clin Cancer Res. 2013 Apr 1;19(7):1784-94.
[3]. Nguyen QD, et al. Temporal and spatial evolution of therapy-induced tumor apoptosis detected by caspase-3-selective molecular imaging. Clin Cancer Res. 2013 Jul 15;19(14):3914-24.
相关化合物：比瑞那帕