鲁索利替尼的生物活性
发布时间：2018-10-14 22:03:32 编辑作者：活性小子
图片：鲁索利替尼结构式
鲁索利替尼是一种口服生物可利用的Janus相关激酶（JAK）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤和免疫调节活性。它的靶点活性为JAK1,3.3nM；JAK2,2.8nM。
一、鲁索利替尼的生物活性详解：
1）体外活性
鲁索利替尼有效且选择性地抑制JAK2V617F介导的信号传导和增殖，以剂量依赖性方式显着增加细胞凋亡，并且在64nM时导致Ba / F3细胞中具有去极化线粒体的细胞加倍。 鲁索利替尼对红细胞集落形成具有显着的效力，IC50为67 nM，并且抑制来自正常供体和真性红细胞增多症患者的红系祖细胞增殖，IC50值分别为407 nM和223 nM [1]。
2）体内活性
鲁索利替尼（180 mg / kg，口服，每日两次）导致第22天存活率大于90％，显着降低脾肿大和炎性细胞因子的循环水平，优先消除肿瘤细胞，导致生存期显着延长，无骨髓抑制或JAK2V617F驱动的小鼠模型中的免疫抑制作用[1]。在鲁索利替尼组中，41.9％的患者达到主要终点，而在骨髓纤维化双盲试验中安慰剂组为0.7％。 鲁索利替尼导致维持脾脏体积减少，总症状评分改善50％或更多[2]。 鲁索利替尼（15 mg每日两次）治疗导致总共28％的患者在第48周时骨髓纤维化患者的脾脏体积减少至少35％，而接受最佳治疗组的患者为0％。使用鲁索利替尼时，平均可触及的脾脏长度减少了56％，但在第48周时使用最佳治疗方法增加了4％。在鲁索利替尼组患者的总体生活质量指标改善，并且症状减轻骨髓纤维化[3]。
二、鲁索利替尼的生物活性实验方法：
1）细胞实验
将细胞以2×103 /孔的白底96孔板接种，用来自DMSO原液的鲁索利替尼（INCB018424）处理（0.2％最终DMSO浓度），并在37℃下用5％CO 2温育48小时。 通过使用Cell-Titer Glo荧光素酶试剂或活细胞计数的细胞ATP测定来测量活力。 将值转化为相对于载体对照的抑制百分比，并使用PRISM GraphPad根据数据的非线性回归分析拟合IC 50曲线。
2）动物实验
给小鼠喂食标准啮齿动物食物并随意提供水。 将Ba / F3-JAK2V617F细胞（每只小鼠105只）静脉内接种到6至8周龄雌性BALB / c小鼠中。 每天监测生存情况，并且死亡的垂死小鼠被人道杀死并且被认为已经死亡。 用载体（5％二甲基乙酰胺，0.5％甲基纤维素）或鲁索利替尼（INCB018424）处理在细胞接种后24小时内开始，每天两次通过口服强饲法。 使用分析的Bayer Advia120测量血液学参数，并使用Dunnett测试确定统计学显着性。
3）激酶实验
使用Sf21细胞和杆状病毒载体表达重组蛋白，并用亲和层析纯化。 JAK激酶测定使用与肽底物（-EQEDEPEGDYFEWLE）的均相时间分辨荧光测定。 每种酶反应用鲁索利替尼或对照，JAK酶，500nM肽，三磷酸腺苷（ATP; 1mM）和2％二甲基亚砜（DMSO）进行1小时。 50％抑制浓度（IC 50）计算为抑制50％荧光信号所需的INCB018424浓度。
参考文献：
[1]. Quintas-Cardama A, et al. Preclinical characterization of the selective JAK1/2 inhibitor INCB018424: therapeutic implications for the treatment of myeloproliferative neoplasms. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.
[2]. Verstovsek S, et al. A double-blind, placebo-controlled trial of ruxolitinib for myelofibrosis. N Engl J Med, 2012, 366(9), 799-807.
[3]. Harrison C, et al. JAK inhibition with ruxolitinib versus best available therapy for myelofibrosis. N Engl J Med. 2012 Mar 1;366(9):787-98.
一、鲁索利替尼的生物活性详解：
1）体外活性
鲁索利替尼有效且选择性地抑制JAK2V617F介导的信号传导和增殖，以剂量依赖性方式显着增加细胞凋亡，并且在64nM时导致Ba / F3细胞中具有去极化线粒体的细胞加倍。 鲁索利替尼对红细胞集落形成具有显着的效力，IC50为67 nM，并且抑制来自正常供体和真性红细胞增多症患者的红系祖细胞增殖，IC50值分别为407 nM和223 nM [1]。
2）体内活性
鲁索利替尼（180 mg / kg，口服，每日两次）导致第22天存活率大于90％，显着降低脾肿大和炎性细胞因子的循环水平，优先消除肿瘤细胞，导致生存期显着延长，无骨髓抑制或JAK2V617F驱动的小鼠模型中的免疫抑制作用[1]。在鲁索利替尼组中，41.9％的患者达到主要终点，而在骨髓纤维化双盲试验中安慰剂组为0.7％。 鲁索利替尼导致维持脾脏体积减少，总症状评分改善50％或更多[2]。 鲁索利替尼（15 mg每日两次）治疗导致总共28％的患者在第48周时骨髓纤维化患者的脾脏体积减少至少35％，而接受最佳治疗组的患者为0％。使用鲁索利替尼时，平均可触及的脾脏长度减少了56％，但在第48周时使用最佳治疗方法增加了4％。在鲁索利替尼组患者的总体生活质量指标改善，并且症状减轻骨髓纤维化[3]。
二、鲁索利替尼的生物活性实验方法：
1）细胞实验
将细胞以2×103 /孔的白底96孔板接种，用来自DMSO原液的鲁索利替尼（INCB018424）处理（0.2％最终DMSO浓度），并在37℃下用5％CO 2温育48小时。 通过使用Cell-Titer Glo荧光素酶试剂或活细胞计数的细胞ATP测定来测量活力。 将值转化为相对于载体对照的抑制百分比，并使用PRISM GraphPad根据数据的非线性回归分析拟合IC 50曲线。
2）动物实验
给小鼠喂食标准啮齿动物食物并随意提供水。 将Ba / F3-JAK2V617F细胞（每只小鼠105只）静脉内接种到6至8周龄雌性BALB / c小鼠中。 每天监测生存情况，并且死亡的垂死小鼠被人道杀死并且被认为已经死亡。 用载体（5％二甲基乙酰胺，0.5％甲基纤维素）或鲁索利替尼（INCB018424）处理在细胞接种后24小时内开始，每天两次通过口服强饲法。 使用分析的Bayer Advia120测量血液学参数，并使用Dunnett测试确定统计学显着性。
3）激酶实验
使用Sf21细胞和杆状病毒载体表达重组蛋白，并用亲和层析纯化。 JAK激酶测定使用与肽底物（-EQEDEPEGDYFEWLE）的均相时间分辨荧光测定。 每种酶反应用鲁索利替尼或对照，JAK酶，500nM肽，三磷酸腺苷（ATP; 1mM）和2％二甲基亚砜（DMSO）进行1小时。 50％抑制浓度（IC 50）计算为抑制50％荧光信号所需的INCB018424浓度。
参考文献：
[1]. Quintas-Cardama A, et al. Preclinical characterization of the selective JAK1/2 inhibitor INCB018424: therapeutic implications for the treatment of myeloproliferative neoplasms. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.
[2]. Verstovsek S, et al. A double-blind, placebo-controlled trial of ruxolitinib for myelofibrosis. N Engl J Med, 2012, 366(9), 799-807.
[3]. Harrison C, et al. JAK inhibition with ruxolitinib versus best available therapy for myelofibrosis. N Engl J Med. 2012 Mar 1;366(9):787-98.
相关化合物：鲁索利替尼
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