奎扎替尼的作用和生物活性
发布时间：2018-11-03 19:47:00 编辑作者：活性达人
图片：奎扎替尼结构式
奎扎替尼是III类受体酪氨酸激酶的选择性抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？
首先我们介绍奎扎替尼的生物活性：
1）体外活性
奎扎替尼（AC220）是一种新型化合物，明确优化为FLT3抑制剂，用于治疗急性髓性白血病（AML）。奎扎替尼抑制FLT3-WT和FLT3-ITD自身磷酸化，IC50分别为4.2±0.3nM和1.1±0.1nM。奎扎替尼抑制MV4-11和A375细胞，IC50分别为0.56±0.3nM和>10000nM。奎扎替尼在细胞试验中以低纳摩尔效力抑制FLT3，并且在筛选大多数人蛋白激酶组时具有高选择性[1]。
2）体内活性
奎扎替尼（AC220）在体内抑制FLT3活性，在每天口服一次剂量低至1mg/kg的FLT3-ITDAML小鼠模型中显着延长存活率，在FLT3依赖性小鼠异种移植模型中消除肿瘤10mg/kg，并有效抑制原代患者细胞中的FLT3活性。通过比较3mg/kg的口服和静脉内药代动力学在大鼠中测定的奎扎替尼的口服生物利用度为约40％。
通过口服强饲法施用单次10mg/kg剂量的奎扎替尼，并且在给药后2个时间点处死小鼠，每组使用4只动物。肿瘤样品中总FLT3和磷酸-FLT3的定量揭示了FLT3自身磷酸化的时间依赖性抑制。FLT3活性在2小时时抑制90％，在给药后24小时抑制40％。因此，基于药代动力学实验，抑制程度与预期的游离奎扎替尼血浆水平相关[1]。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
小鼠[1]-使用雌性NU/NU或严重联合免疫缺陷小鼠。奎扎替尼（盐酸盐）配制成22％羟丙基-β-环糊精，CEP-701配制成20％gelucire44/14水溶液（体积/体积），MLN-518和舒尼替尼配制成10mM柠檬酸钠（pH值）3.5），PKC-412以3：1gelucire44/14-丙二醇（体积/体积）配制，索拉非尼（甲苯磺酸盐）配制在80％PEG-400中。选择化合物浓度以10mL/kg的体积递送所需剂量。
通过口服强饲法给予化合物，并在给药后0.25,0.5,1,2,4,6和24小时收集血浆样品。为了收集血浆样品，使用3组每组3只动物进行半视觉上的眼部出血（150μL），每只动物服用2至3个时间点以获得总共3个独立的血浆浓度时间过程。用4体积含有内标的乙腈提取血浆样品和对照（25μL），并通过液相色谱串联质谱分析。
2）细胞实验
MV4-11和RS4;11细胞分别在具有10％胎牛血清（FBS）的Iscove培养基和10％FBS的RPMI培养基中培养。对于增殖测定，将细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，然后以每孔40000个细胞接种于96孔板中。将抑制剂（例如，奎扎替尼）加入细胞中并在37℃下孵育72小时。使用CellTiter-BlueCellViabilityAssay测量细胞活力。
为了测量对FLT3自磷酸化的抑制，将细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，并在第二天以9600孔板中每孔400000个细胞的密度接种。将细胞与抑制剂（例如奎扎替尼）在37℃温育2小时。为了在RS4;11细胞中诱导FLT3自磷酸化，在2小时化合物孵育后加入100ng/mLFLT3配体15分钟。
制备细胞裂解物并在预涂有总FLT3捕获抗体的96孔板中温育。将涂覆的板与针对FLT3的生物素化抗体一起温育以检测总FLT3或针对磷酸酪氨酸的抗体以检测FLT3自身磷酸化。在这两种情况下，SULFO标记的链霉抗生物素蛋白二抗用于MesoScaleDiscovery平台上的电化学发光检测[1]。
3）激酶实验
抑制FLT3自身磷酸化：测量FLT3自身磷酸化，MV4-11或RS4的抑制;将11个细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，并以96孔板中每孔400000个细胞的密度接种。次日将细胞与不同浓度的AC220在37℃下孵育2小时。为了在RS4;11细胞中诱导FLT3自磷酸化，在2小时AC220孵育后加入100ng/mLFLT3配体15分钟。
制备细胞裂解物并在预涂有总FLT3捕获抗体的96孔板中温育。将涂覆的板与针对FLT3的生物素化抗体一起温育以检测总FLT3或针对磷酸酪氨酸的抗体以检测FLT3自身磷酸化。在两种情况下，SULFO标记的链霉抗生物素蛋白二抗用于MesoScaleDiscovery平台上的电化学发光检测。抑制FLT3-ITD或TLT3-WT自身磷酸化50％的AC220浓度代表IC50值。
今天介绍了奎扎替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。小编给您做一个总结：奎扎替尼奎扎替尼(AC220)是一种有效的Flt3酪氨酸激酶抑制剂，Kd值为1.6±0.7nM。它的靶点活性为FLT3(ITD),1.1nM；FLT3(WT),4.2nM。
您可能想了解奎扎替尼的物理化学性质（https://www.chemsrc.com/cas/950769-58-1_599541.html）。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Zarrinkar PP, et al. AC220 is a uniquely potent and selective inhibitor of FLT3 for the treatment of acute myeloid leukemia (AML). Blood, 2009, 114(14), 2984-2992.
[2]. Puissant A, et al. SYK is a critical regulator of FLT3 in acute myeloid leukemia. Cancer Cell. 2014 Feb 10;25(2):226-42.
首先我们介绍奎扎替尼的生物活性：
1）体外活性
奎扎替尼（AC220）是一种新型化合物，明确优化为FLT3抑制剂，用于治疗急性髓性白血病（AML）。奎扎替尼抑制FLT3-WT和FLT3-ITD自身磷酸化，IC50分别为4.2±0.3nM和1.1±0.1nM。奎扎替尼抑制MV4-11和A375细胞，IC50分别为0.56±0.3nM和>10000nM。奎扎替尼在细胞试验中以低纳摩尔效力抑制FLT3，并且在筛选大多数人蛋白激酶组时具有高选择性[1]。
2）体内活性
奎扎替尼（AC220）在体内抑制FLT3活性，在每天口服一次剂量低至1mg/kg的FLT3-ITDAML小鼠模型中显着延长存活率，在FLT3依赖性小鼠异种移植模型中消除肿瘤10mg/kg，并有效抑制原代患者细胞中的FLT3活性。通过比较3mg/kg的口服和静脉内药代动力学在大鼠中测定的奎扎替尼的口服生物利用度为约40％。
通过口服强饲法施用单次10mg/kg剂量的奎扎替尼，并且在给药后2个时间点处死小鼠，每组使用4只动物。肿瘤样品中总FLT3和磷酸-FLT3的定量揭示了FLT3自身磷酸化的时间依赖性抑制。FLT3活性在2小时时抑制90％，在给药后24小时抑制40％。因此，基于药代动力学实验，抑制程度与预期的游离奎扎替尼血浆水平相关[1]。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
小鼠[1]-使用雌性NU/NU或严重联合免疫缺陷小鼠。奎扎替尼（盐酸盐）配制成22％羟丙基-β-环糊精，CEP-701配制成20％gelucire44/14水溶液（体积/体积），MLN-518和舒尼替尼配制成10mM柠檬酸钠（pH值）3.5），PKC-412以3：1gelucire44/14-丙二醇（体积/体积）配制，索拉非尼（甲苯磺酸盐）配制在80％PEG-400中。选择化合物浓度以10mL/kg的体积递送所需剂量。
通过口服强饲法给予化合物，并在给药后0.25,0.5,1,2,4,6和24小时收集血浆样品。为了收集血浆样品，使用3组每组3只动物进行半视觉上的眼部出血（150μL），每只动物服用2至3个时间点以获得总共3个独立的血浆浓度时间过程。用4体积含有内标的乙腈提取血浆样品和对照（25μL），并通过液相色谱串联质谱分析。
2）细胞实验
MV4-11和RS4;11细胞分别在具有10％胎牛血清（FBS）的Iscove培养基和10％FBS的RPMI培养基中培养。对于增殖测定，将细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，然后以每孔40000个细胞接种于96孔板中。将抑制剂（例如，奎扎替尼）加入细胞中并在37℃下孵育72小时。使用CellTiter-BlueCellViabilityAssay测量细胞活力。
为了测量对FLT3自磷酸化的抑制，将细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，并在第二天以9600孔板中每孔400000个细胞的密度接种。将细胞与抑制剂（例如奎扎替尼）在37℃温育2小时。为了在RS4;11细胞中诱导FLT3自磷酸化，在2小时化合物孵育后加入100ng/mLFLT3配体15分钟。
制备细胞裂解物并在预涂有总FLT3捕获抗体的96孔板中温育。将涂覆的板与针对FLT3的生物素化抗体一起温育以检测总FLT3或针对磷酸酪氨酸的抗体以检测FLT3自身磷酸化。在这两种情况下，SULFO标记的链霉抗生物素蛋白二抗用于MesoScaleDiscovery平台上的电化学发光检测[1]。
3）激酶实验
抑制FLT3自身磷酸化：测量FLT3自身磷酸化，MV4-11或RS4的抑制;将11个细胞在低血清培养基（0.5％FBS）中培养过夜，并以96孔板中每孔400000个细胞的密度接种。次日将细胞与不同浓度的AC220在37℃下孵育2小时。为了在RS4;11细胞中诱导FLT3自磷酸化，在2小时AC220孵育后加入100ng/mLFLT3配体15分钟。
制备细胞裂解物并在预涂有总FLT3捕获抗体的96孔板中温育。将涂覆的板与针对FLT3的生物素化抗体一起温育以检测总FLT3或针对磷酸酪氨酸的抗体以检测FLT3自身磷酸化。在两种情况下，SULFO标记的链霉抗生物素蛋白二抗用于MesoScaleDiscovery平台上的电化学发光检测。抑制FLT3-ITD或TLT3-WT自身磷酸化50％的AC220浓度代表IC50值。
今天介绍了奎扎替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。小编给您做一个总结：奎扎替尼奎扎替尼(AC220)是一种有效的Flt3酪氨酸激酶抑制剂，Kd值为1.6±0.7nM。它的靶点活性为FLT3(ITD),1.1nM；FLT3(WT),4.2nM。
您可能想了解奎扎替尼的物理化学性质（https://www.chemsrc.com/cas/950769-58-1_599541.html）。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Zarrinkar PP, et al. AC220 is a uniquely potent and selective inhibitor of FLT3 for the treatment of acute myeloid leukemia (AML). Blood, 2009, 114(14), 2984-2992.
[2]. Puissant A, et al. SYK is a critical regulator of FLT3 in acute myeloid leukemia. Cancer Cell. 2014 Feb 10;25(2):226-42.
相关化合物：奎扎替尼
上一篇：坦度替尼的作用和生物活性