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HSF1A

HSF1A用途

HSF1A 是一种可渗透细胞的热休克转录因子1 (HSF1) 活化剂。

HSF1A名称

[ CAS 号 ]:
1196723-93-9

[ 中文名 ]:
HSF1A

[ 英文名 ]:
HSF1A

[英文别名 ]:

HSF1A

HSF1A生物活性

[ 描述 ]:

HSF1A 是一种可渗透细胞的热休克转录因子1 (HSF1) 活化剂。

[ 相关类别 ]:

研究领域 >> 癌症

研究领域 >> 心血管疾病

[ 靶点 ]

HSF1

[体外研究]

HSF1A保护细胞免受应激诱导的细胞凋亡,结合TRiC亚基并抑制TRiC活性而不扰乱ATP水解。 TRiC复合物的遗传失活或消耗导致人HSF1活化,HSF1A在体外抑制纯化的TRiC和HSF1之间的直接相互作用。此外,使用与HSF1A偶联的FITC的荧光各向异性实验证明HSF1A-FITC以约600nM的亲和力结合TRiC的纯化Tcp1亚基。通过将纯化的Tcp1滴定到含有500nM生物素或HSF1A-生物素的结合反应中定性验证[1]。通过计数含有聚集体的细胞数作为细胞总数的函数的定量揭示,在HSF1A浓度低至2μM时,观察到含有聚集物的细胞数量减少。含有聚集体的细胞部分以剂量依赖性方式继续降低,使得用12μMHSF1A预处理导致~20％的细胞显示出通过荧光显微镜观察到的聚集体[2]。

[体内研究]

HSF1A增强HSF1活性,稳定HSF1表达并最小化阿霉素(DOX)诱导的心脏损伤。用DOX(累积剂量：30mg/kgw)和DOX与HSF1A(100mg/kgw /天)组合攻击WKY大鼠。补充HSF1A可显着提高心脏功能,恢复到对照组的水平。已显示HSF1A在神经变性疾病模型中刺激人HSF1核转位,提高蛋白质伴侣蛋白表达并改善蛋白质错误折叠和细胞死亡。超声心动图结果显示,HSF1A还可减轻DOX诱导的心功能衰竭[3]。

[激酶实验]

使用补充有1％Trition-X100和蛋白酶的生物素结合缓冲液（20 mM HEPES，5 mM MgCl 2,1 mM EDTA，100 mM KCl，0.03％NP-40）从哺乳动物，酵母和大肠杆菌培养物中产生蛋白质提取物抑制剂。将约0.5mg蛋白质提取物与100μMHSF1A-生物素在4℃温育4小时，并用NeutrAvidin琼脂糖树脂捕获HSF1A-生物素相关蛋白。在生物素结合缓冲液中洗涤后，使用50μL生物素洗脱缓冲液（100mM Tris，150mM NaCl，0.1mM EDTA，2mM D-生物素）洗脱蛋白质，在4-20％SDS-PAGE上分离，并进行免疫印迹。对于纯化的TRiC和Hsp70分析，将5nM蛋白质在生物素结合缓冲液+ 0.5％Triton X-100中与100μM生物素或100μMHSF1A-生物素在4℃温育4小时并用NeutrAvidin树脂捕获。对于NiNTA纯化酵母Tcp1，将25mM Hepes pH 7.5,150 mM NaCl中不同浓度的Tcp10.5μM，1 mM，2 mM，3 mM和4 mM与0.5μM生物素或HSF1A-Biotin在4°温育4小时C并用NeutrAvidin Resin [1]捕获。

[细胞实验]

将接种到96孔板（5×10 4细胞/孔）中的PC12细胞用递增浓度的HSF1A（2,4,8和12μM）处理15小时，此时通过孵育来刺激httQ74-GFP表达。 1μg/ mL多西环素的存在5天。通过XTT活力测定评估细胞活力[2]。

[动物实验]

大鼠[3]使用10周龄的Wistar Kyoto大鼠（WKY）。在食物和自来水的12小时光照/黑暗循环中将大鼠圈养在恒定温度（22℃）下。将动物分成三组：WKY大鼠（对照组），DOX大鼠和用HSF1A处理的DOX大鼠。每组包含五只动物。 DOX组注射DOX（5 mg / kg）连续6周腹腔注射，以达到30 mg / kg的累积剂量，这已被充分证明可达到心脏毒性。腹膜内注射小分子HSF1激活剂HSF1A（100mg / kg /天）。

[参考文献]

[1]. Neef DW, et al. A direct regulatory interaction between chaperonin TRiC and stress-responsive transcription factor HSF1. Cell Rep. 2014 Nov 6;9(3):955-66.

[2]. Neef DW, et al. Modulation of heat shock transcription factor 1 as a therapeutic target for small molecule intervention in neurodegenerative disease. PLoS Biol. 2010 Jan 19;8(1):e1000291.

[3]. Huang CY, et al. Doxorubicin attenuates CHIP-guarded HSF1 nuclear translocation and protein stability to trigger IGF-IIR-dependent cardiomyocyte death. Cell Death Dis. 2016 Nov 3;7(11):e2455.

[相关活性小分子]