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4-[4-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-6-[1-(甲基磺酰基)环丙基]-2-嘧啶基]-1H-吲哚

用途

AZ20 是一种有效的,选择性的 ATR 抑制剂,IC50 值为 5 nM；同时可抑制 mTOR 活性,IC50 值为 38 nM。

名称

[ CAS 号 ]:
1233339-22-4

[ 中文名 ]:
4-[4-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-6-[1-(甲基磺酰基)环丙基]-2-嘧啶基]-1H-吲哚

[ 英文名 ]:
AZ20

[英文别名 ]:

AZ20

生物活性

[ 描述 ]:

AZ20 是一种有效的,选择性的 ATR 抑制剂,IC50 值为 5 nM；同时可抑制 mTOR 活性,IC50 值为 38 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> ATM/ATR

信号通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信号通路 >> ATM/ATR

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

ATR:5 nM (IC50)

mTOR:38 nM (IC50)

PI3Kα:13000 nM (IC50)

[体外研究]

AZ20抑制ATR从HeLa核提取物中免疫沉淀,IC50为5 nM,ATR介导HT29结直肠腺癌肿瘤细胞中Chk1的磷酸化,IC50为50 nM [1]。

[体内研究]

AZ20(25,50mg/kg,口服)具有高渗透性和对大鼠肝细胞的良好稳定性,并且尽管在获得显着更高的溶解度方面缺乏进展,但在低剂量大鼠PK研究中具有可观的生物利用度。 AZ20(25,50 mg/kg,po)在携带LoVo肿瘤的雌性裸鼠中导致显着的肿瘤生长抑制[1]。

[激酶实验]

用于体外酶测定的ATR通过用以下缓冲液中含有的ATR的氨基酸400-480的兔多克隆抗血清进行免疫沉淀从HeLa核提取物获得：25mM HEPES（pH 7.4），2mM MgCl 2,250mM NaCl，0.5mM EDTA，0.1mM Na 3 VO 4,10％v / v甘油和0.01％v / v吐温20.通过与蛋白A-Sepharose珠孵育1小时然后通过离心从核提取物中分离ATR-抗体复合物。恢复珠子。在96孔板的孔中，将含有10μL含ATR的Sepharose珠与1μg底物谷胱甘肽S-转移酶-p53N66（与谷胱甘肽S-转移酶融合的p53的NH2-末端66个氨基酸）在E.中表达。大肠杆菌在ATR测定缓冲液（50 mM HEPES（pH 7.4），150 mM NaCl，6 mM MgCl 2,4 mM MnCl 2,0.1 mM Na3VO4,0.1 mM DTT和10％（v / v）甘油）中于37°C in是否存在抑制剂。在轻微摇动10分钟后，加入ATP至终浓度为3μM，并使反应在37℃下继续另外1小时。通过加入100μLPBS终止反应，并将反应物转移至涂有白色不透明谷胱甘肽的96孔板中，并在4℃温育过夜。然后将该板用PBS / 0.05％（v / v）吐温20洗涤，印迹干燥，并通过标准ELISA技术用磷酸丝氨酸15p53抗体分析。磷酸化谷胱甘肽S-转移酶-p53N66底物的检测与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶偶联的二抗组合进行。增强的化学发光溶液用于产生信号，化学发光检测通过TopCount读板器进行。然后将得到的计算的％酶活性用于测定化合物的IC 50值（IC 50作为抑制50％酶活性的浓度）。

[细胞实验]

通过使用Labcyte Echo声学分配仪器在100％DMSO中稀释然后进一步进入测定培养基（EMEM，10％FCS，1％谷氨酰胺）来产生化合物剂量范围。将细胞以9×10 4个细胞/ mL接种于384孔Costar板中，在40μLEMEM，10％FCS，1％谷氨酰胺中培养24小时。加入化合物后，将细胞温育60分钟。然后使用Labcyte Echo添加终浓度为3μM的4NQO（在100％DMSO中制备），并将细胞再温育60分钟。通过添加40μL的3.7％v / v甲醛溶液将细胞固定20分钟。去除固定后，用PBS洗涤细胞并在含有0.1％Triton X-100的40μLPBS中透化。然后洗涤细胞，并加入15μL一抗溶液（pChk1 Ser345）。将板在4℃温育过夜。然后洗去第一抗体，并在室温下加入20μL第二抗体溶液和1μMHoechst33258 90分钟。将板洗涤并留在40μLPBS中。然后在ArrayScan VTI仪器上读取平板以确定染色强度，并获得剂量响应并用于确定化合物的IC 50值。

[动物实验]

雌性Swiss nu / nu小鼠饲养在负压隔离器中。通过在左背侧皮下注射1×107个肿瘤细胞（100μL无血清培养基），在8至12周龄小鼠中建立LoVo肿瘤异种移植物。当肿瘤变得可触知时，将动物随机分入治疗组。 AZ20在10％DMSO / 40％丙二醇/ 50％水中制备并口服给药。用卡尺每周测量肿瘤最多三次。计算肿瘤体积，并使用每组的几何平均值对时间绘制数据。

[参考文献]

[1]. Foote KM, et al. Discovery of 4-{4-[(3R)-3-Methylmorpholin-4-yl]-6-[1-(methylsulfonyl)cyclopropyl]pyrimidin-2-yl}-1H-indole (AZ20): a potent and selective inhibitor of ATR protein kinase with monotherapy in vivo antitumor activity. J Med Chem. 2013 Mar 14

[相关活性小分子]

渥曼青霉素 | Ceralasertib | Berzosertib (VE-822) | 2-吗啉-4-基-6-噻蒽-1-基吡喃-4-酮 | VE-821 | AZD0156 | 2-((2R,6S)-rel-2,6-二甲基吗啉基)-N-(5-(6-吗啉基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-9H-噻吨-2-基)乙酰胺 | AZD1390 | 1-(6,7-二甲氧基-4-喹唑啉基)-3-(2-吡啶基)-1H-1,2,4-三唑-5-胺 | CGK733 | alpha,alpha-二甲基-4-[2-氧代-9-(3-喹啉基)-2H-[1,3]恶嗪并[5,4-c]喹啉-1(4H)-基]-苯乙腈 | KU 59403

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.4±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
634.6±55.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₂₁H₂₄N₄O₃S

[ 分子量 ]:
412.505

[ 闪点 ]:
337.6±31.5 °C

[ 精确质量 ]:
412.156921

[ PSA ]:
93.13000

[ LogP ]:
0.50

[ 外观性状 ]:
粉末

[ 蒸汽压 ]:
0.0±1.9 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.687

[ 储存条件 ]:
-20℃

安全信息

[ 符号 ]:

GHS07

[ 信号词 ]:
Warning

[ 危害声明 ]:
H302

[ 警示性声明 ]:
P301 + P312 + P330

[ 危险品运输编码 ]:
NONH for all modes of transport

4-[4-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-6-[1-(甲基磺酰基)环丙基]-2-嘧啶基]-1H-吲哚

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名称

生物活性

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