[ 描述 ]:
INCB3344 是一种有效的 CCR2 拮抗剂,拮抗结合活性时,IC50 为 5.1 nM (hCCR2) 和 9.5 nM (mCCR2),拮抗趋化活性时,IC50 为 3.8 nM (hCCR2) 和 7.8 nM (mCCR2)。
[ 相关类别 ]:
[ 靶点 ]
hCCR2:5.1 nM (IC50)
mCCR2:9.5 nM (IC50)
[体外研究]
INCB3344也是对大鼠和食蟹猴CCR2的有效拮抗剂,其结合拮抗作用的IC50值分别为7.3和16 nM,对趋化性活性的拮抗作用分别为2.7和6.2 nM。 INCB3344是一种选择性hCCR2拮抗剂,对一组> 50个离子通道,转运蛋白,趋化因子受体和其他选定的GPCR表现出超过1μM的IC50值。它也是一种选择性mCCR2拮抗剂,对小鼠CCR1和鼠CCR5分别显示>1μM和>3μM的IC50值,mCCR2是两种最同源的趋化因子受体[1]。首先通过使用鼠单核细胞系WEHI-274.1和125I标记的mCCL2作为示踪物,在全细胞结合测定中测试其抑制CCL2与CCR2结合的能力来评估INCB3344的药理学活性的表征。在该测定中,INCB3344的结合IC50被确定为10±5nM,并且在90nM的浓度下观察到> 90％结合的抑制[2]。
[体内研究]
当静脉内施用于CD-1小鼠时,INCB3344表现出高清除率和适度的分布容量,导致1小时的短半衰期。然而,尽管其高清除率,但实现了良好的口服暴露,在10mg/kg的剂量下AUC为2664nM h。口服生物利用度为47％。相比之下,当以相同剂量口服给予Balb/c小鼠时,获得略微更好的口服暴露(AUC = 3888nM h)。这种PK特性与其有效的抗mCCR2活性和良好的选择性相结合,使得该化合物适用于啮齿动物的模型研究[1]。 INCB3344可防止醋酸脱氧皮质酮(DOCA)/盐诱导的CCR2血管表达变化。在另一系列实验中,与假手术动物相比,从DOCA /盐处理期第7天至第21天接受INCB3344的小鼠的主动脉中CCR2表达升高(≈1.5倍);然而,该水平的CCR2表达显着低于载体处理组中观察到的水平(P <0.05,n = 6)。同样,在接受INCB3344的小鼠中,其受体配体CCL2在DOCA /盐处理的小鼠中的表达增加被钝化(P <0.05,n = 6)。相比之下,接受媒介物或INCB3344的DOCA /盐处理的小鼠中CCL7,CCL8和CCL12的水平升高到相似的程度[3]。
[激酶实验]
WEHI 274.1（鼠单核细胞系）细胞用于全细胞结合测定。将RPMI 1640（VWR）中的细胞（5×105），+ 0.1％BSA + 20mM HEPES（VWR）加入RPMI 1640中的各种浓度的INCB3344中，然后立即加入150μM125I标记的mCCL2（小鼠CCL2）。 （JE））并在室温（RT）下孵育30分钟。对于非特异性对照，添加0.3μMmCCL2代替INCB3344。然后通过1.2-μm聚偏二氟乙烯过滤器收获细胞，将过滤器风干，并通过在γ计数器中计数来确定结合。据报道，拮抗剂活性是特异性结合的IC50所需的抑制剂浓度。特异性结合定义为总结合减去非特异性结合，通常占总结合的97％[2]。
[细胞实验]
将具有或不具有各种浓度的RPMI 1640中的INCB3344的RPMI 1640（VWR）中的WEHI-274.1细胞（5×105）加载到96孔改良的Boyden室中的8-μm聚碳酸酯滤器顶部的孔中。在过滤器下方，将具有或不具有INCB3344的30nM mCCL2或培养基置于相应的96孔板中。将密封的室在37℃，5％CO 2下孵育45分钟。洗涤过滤器，用Wright-Giemsa染色，并通过显微镜计数在底室中向mCCL2迁移的细胞数。 INCB3344拮抗CCR2介导的趋化性的能力被报道为特异性迁移至mCCL2的IC50值所需的抑制剂浓度。特定迁移定义为总迁移减去后台迁移。通过使用小鼠MIP-1α作为配体，使用类似的测定来确定INCB3344对CCR1介导的WEHI-274.1细胞趋化性的影响。此外，在INCB3344存在下类似地测试C5a，FMLP和RANTES以迁移WEHI-274.1细胞。对于INCB3344对CCR5介导的趋化性的影响的研究，将鼠T细胞用作以小鼠MIP-1β作为配体的细胞系统[2]。
[动物实验]
小鼠[3]在一部分实验中，DOCA /盐处理的小鼠被进一步随机分配接受CCR2拮抗剂，INCB3344（每天30 mg / kg; Haoyuan Chemexpress Co Ltd）或载体（10％DMSO / 0.9％羧甲基纤维素） ）通过每天腹腔注射，在诱导高血压后10天开始并持续至21天治疗期结束。用于这些实验的血压正常对照组由假处理的小鼠组成，所述小鼠从第10天至第21天接受载体。大鼠[4]使用成年雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250g）。在t = 0基线测量后，在异氟烷/氧气（5％; 2L / min）流量下轻度麻醉大鼠，并且鞘内施用25μL盐水（载体），1μgCCL2和/或1mM INCB3344。在L5和L6椎骨之间。在给药后30,60,90,120和240分钟测试动物一次。计算每个时间点的最大潜在效应（MPE）的百分比。
[参考文献]
[1]. Xue CB, et al. Discovery of INCB3344, a potent, selective and orally bioavailable antagonist of human and murine CCR2. Bioorg Med Chem Lett. 2010 Dec 15;20(24):7473-8
[2]. Brodmerkel CM, et al. Discovery and pharmacological characterization of a novel rodent-active CCR2 antagonist, INCB3344. J Immunol. 2005 Oct 15;175(8):5370-8.
[3]. Chan CT, et al. Reversal of vascular macrophage accumulation and hypertension by a CCR2 antagonist in deoxycorticosterone/salt-treated mice. Hypertension. 2012 Nov;60(5):1207-12.
[4]. Dansereau MA, et al. Spinal CCL2 pronociceptive action is no longer effective in CCR2 receptor antagonist-treated rats. J Neurochem. 2008 Jul;106(2):757-69.
[5]. Zhao W, et al. Enrichment of Ly6Chi monocytes by multiple GM-CSF injections with HBV vaccine contributes to viral clearance in a HBV mouse model. Hum Vaccin Immunother. 2017 Dec 2;13(12):2872-2882.
[6]. Aye-Mon A, et al. CCR2 upregulation in DRG neurons plays a crucial role in gastric hyperalgesia associated with diabetic gastropathy. Mol Pain. 2018 Jan-Dec;14:1744806917751322.
[7]. Cassini MF, et al. Mcp1 Promotes Macrophage-Dependent Cyst Expansion in Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease. J Am Soc Nephrol. 2018 Oct;29(10):2471-2481.
[相关活性小分子]