瑞德南特

Preladenant 是一种有效,竞争性的人腺苷 A2A 受体拮抗剂,Ki 为 1.1 nM,比其他腺苷受体选择性高100倍以上。

信号通路 >> G 蛋白偶联受体/G 蛋白 >> 腺苷受体

研究领域 >> 神经疾病

Ki: 1.1 nM (Adenosine A2A receptor)[1]

Preladenant还完全拮抗表达重组人A2A受体的细胞中的cAMP。确定Preladenant在A2A受体上具有1.3nM的KB值;该值与放射性配体结合试验中测定的Ki值非常一致。使用表达A2B受体的细胞的类似功能测定来证明对A2B受体的选择性。在该测定中,Preladenant的KB值为1.2μM,表明Preladenant对A2A受体的选择性比对A2B受体高923倍[1]。

在每日重复给药后,Preladenant(1mg/kg)抑制L-多巴诱导的行为致敏,这表明运动障碍发展的风险降低。 Preladenant在行为绝望模型中表现出抗抑郁样特征,即小鼠尾悬吊试验和小鼠和大鼠强迫游泳试验[1]。在1mg/kg(最低分数：9.0)和3mg/kg(最低分数：6.5)的剂量下,Preladenant产生剂量依赖性的帕金森病评分降低。亚阈值剂量的Preladenant将用3mg/kg L-多巴治疗的动物的最小和平均帕金森病评分分别降低至5.25和6.88。 Wilcoxin测试用于比较个体治疗与媒介物。 Preladenant(3 mg/kg),L-Dopa(3,6和12 mg/kg),以及Preladenant和L-Dopa(1或3 mg/kg + 3 mg/kg)的组合均显着改善帕金森病的最低分数。此外,相对于3 mg/kg L-Dopa组,12 mg/kg L-Dopa和L-Dopa + Preladenant组的最小和平均帕金森病评分均显着改善[2]。

使用由具有重组腺苷受体表达的细胞制备的膜进行受体结合：人A2A和HEK 293，大鼠A2A和中国仓鼠卵巢，人和大鼠A1和中国仓鼠卵巢，以及人A3和HEK 293.放射性配体竞争结合在96孔板中以200μL的总测定体积进行测定，最终测试药物浓度范围为0.1至3μM。将膜在pH 7.4的测定缓冲液（A1和A2A，含有10mM MgCl 2的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水; A3,50mM Tris-HCl，120mM NaCl，10mM MgCl 2）中稀释。为了从膜制剂中除去内源性腺苷，将4U / mL腺苷脱氨酶加入膜中，然后将其在室温下孵育15分钟。加入放射性配体至终浓度为0.5（[3H] SCH 58261，A2A），1（[3H] DPCPX，A1）或0.25（[125 I] AB-MECA，A3）nM。通过添加100nM CGS 15923（A2A），100nM NECA（A1）或100nM DPCPX（A3）来定义非特异性结合。将板在室温下孵育并搅拌1.5小时（A2A和A1）或2小时（A3）。将膜过滤到Packard GF-B滤板上，并使用Brandel细胞收集器在冰冷的测定缓冲液中洗涤，以分离结合的和游离的放射性配体。将板干燥，然后向每个孔中加入45μLMicroscint20。通过使用迭代曲线拟合程序拟合位移曲线来确定IC 50值。 Ki值使用Cheng-Prusoff方程[1]计算。

稳定表达人A2A或A2B受体的HEK 293细胞生长至汇合，使用无酶细胞解离缓冲液收获并通过离心沉淀（1000g; 5分钟）。洗涤细胞并在补充有10nM HPS，pH7.4,5mM MgCl 2和0.2％牛血清白蛋白的Hanks平衡盐溶液中稀释至4×10 6个细胞/ mL的最终密度。将Preladenant在上述缓冲液中稀释，加入以下组分以达到各自的最终测定浓度：0.25％DMSO，2U / mL腺苷脱氨酶和100μMLo2017。将细胞悬浮液（20μL）在37℃预温育15分钟。在含有25μL载体或Preladenant的96孔板中的室温。然后加入10倍所需浓度的CGS-21680（A2A）或5-N-环丙基甲酰氨基腺苷（A2B），并将反应物在37℃温育15分钟。通过添加50μL测定/裂解缓冲液终止反应。绘制了在存在和不存在Preladenant的情况下CGS-21680的浓度响应曲线，并且通过使用GraphPad Prism软件[1]拟合曲线来确定EC 50值。

小鼠和大鼠[1]使用雄性CD大鼠和雄性CD1小鼠。将预聚物以50％聚乙二醇400口服给药，剂量体积为3至5mL / kg。在强迫游泳试验（FST）中，将小鼠单独放入用水（25℃）填充至10cm深度的玻璃圆筒中并放置6分钟。当鼠标以直立位置漂浮并且仅做小动作以将其头部保持在水上时，判断它是不动的。在6分钟测试期的最后4分钟期间，由对动物治疗无视的观察者记录不动的持续时间。在行为测试之前1小时给动物施用载体，Preladenant或SCH 412348。将每只大鼠单独放置在水柱（25℃）中并使其游离15分钟，然后取出并在加热的外壳中干燥并返回其笼子。二十四小时后（测试日），将动物再次暴露于该条件，记录5分钟期间的总不动时间。另外，记录大鼠花在攀爬圆筒侧面的持续时间。在测试当天，在行为测试之前1小时给每只动物服用Preladenant，SCH 412348或载体。猴子[2]使用六只雌性食蟹猴（Macaca fascicularis）猴子（体重3.5-4.2kg）。通过皮下（sc）施用MPTP（2-3mg / kg）每周一次使动物成为帕金森病，直至通过帕金森病残疾测量发生稳定的帕金森综合征（至少一个月的未改变的残疾评分为8或更高）。规模。在最后一次施用MPTP后至少2个月，用Prolopa（左旋多巴/苄丝肼，100 / 25mg）长期治疗猴子，直至形成清晰且可重复的运动障碍。在这些猴子中进行本发明的L-多巴和Preladenant（1mg / kg和3mg / kg，口服）的实验。

[1]. Hodgson RA, et al. Characterization of the potent and highly selective A2A receptor antagonists preladenant and SCH 412348 [7-[2-[4-2,4-difluorophenyl]-1-piperazinyl]ethyl]-2-(2-furanyl)-7H-pyrazolo[4,3-e][1,2,4]triazolo[1,5-c]pyrimidin-5-amine] in rodent

[2]. Hodgson RA, et al. Preladenant, a selective A(2A) receptor antagonist, is active in primate models of movement disorders. Exp Neurol. 2010 Oct;225(2):384-90.

CGS 21680盐酸盐 | ZM 241385 | CPI-444 | 2-(2-呋喃基)-7-(2-苯基乙基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]噻唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 | Vipadenant | 伊曲茶碱 | 4-羟基-N-[4-甲氧基-7-(4-吗啉基)-2-苯并噻唑基]-4-甲基-1-哌啶甲酰胺 | AZD-4635 | 卡帕诺生 | 氯-IB-MECA | PSB-12379 | CD73-IN-1 | 匹利诺生 | 二羟丙茶碱 | 多索茶碱