| 描述 |
Cort108297 是一种高亲和性的特异性糖皮质激素受体 (GR) 拮抗剂,Ki 值为 0.45 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Ki: 0.45 nM (glucocorticoid receptor)[1]
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| 体外研究 |
在LAPC4细胞中,与单独的R1881/Enzalutamide(RE)处理相比,与地塞米松共处理诱导稳态SGK1表达1.7倍。添加CORT118335(1μM)可抑制地塞米松诱导的SGK1表达50％,而Cort108297完全阻断地塞米松介导的SGK1增加(p <0.05)。与用RE处理相比,地塞米松使KLK3表达增加2.5倍。 Cort108297和CORT118335均拮抗地塞米松诱导的KLK3表达(分别为48％和60％,p <0.05)。在CWR-22Rv1细胞中3天的地塞米松±SGRM后,与RE处理的细胞相比,SGK1基因表达被显着诱导约100倍,并且这种诱导被Cort108297和CORT118335完全消除(p <0.01)。与CWR-22Rv1细胞中的RE相比,地塞米松也诱导KLK3(7.5倍); Cort108297和CORT118335分别抑制这种诱导70％和75％(p <0.01)[2]。
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| 体内研究 |
给10周龄雄性C57BL/6J小鼠喂食含有60％脂肪卡路里的饮食和补充有11％蔗糖的水4周。组(n = 8)接受以下一项：Cort108297(80 mg/kg QD),Cort108297(40 mg/kg BID),米非司酮(30 mg/kg BID),罗格列酮(10 mg/kg QD)或载体。与接受高脂肪,高糖饮食加载体的小鼠相比,接受高脂肪,高糖饮食加米非司酮或Cort108297的小鼠体重明显减轻。在四周治疗期结束时,接受Cort108297 40 mg/kg BID或Cort108297 80 mg/kg QD的小鼠也比接受载体的小鼠具有显着更低的稳定血浆葡萄糖[3]。雄性大鼠用米非司酮(10mg/kg),Cort108297(30mg/kg和60mg/kg),丙咪嗪(10mg/kg)或载体治疗5天,并暴露于强迫游泳试验(FST)或束缚应激。两种剂量的Cort108297都有效抑制峰值皮质酮对FST的反应和抑制压力。然而,只有较高剂量的Cort108297(60mg/kg)才能显着降低强迫游泳试验(FST)的不动性[4]。
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| 激酶实验 |
类固醇受体竞争结合测定在含有20mM HEPES缓冲液（pH = 7.6），0.2mM EDTA，75mM NaCl，1.5mM MgCl 2,20％甘油，20mM钼酸钠，0.2mM DTT，20μg/ mL的缓冲液中进行。抑肽酶和20μg/ mL Leupeptin（测定缓冲液）。放射性标记的配体用于检测与表达受体的细胞的结合，包括0.25nM [3H]醛固酮用于盐皮质激素受体（MR）结合，0.3nM [3H]地塞米松用于GR结合，0.36nM [3H]甲基三烯酮用于醛固酮受体（AR）结合，和0.29nM [3H]甲基三烯酮用于PR结合。受体在人胚胎肾293（HEK-293）细胞中重组表达，并且20μg293-MR裂解物，20μg293-GR裂解物，22μg293-AR裂解物或40μg293-PR裂解物是每孔添加。竞争的测试化合物（例如，Cort108297）以0.01nM至10μM的各种浓度添加。在500nM醛固酮存在下用于MR结合，500nM地塞米松用于GR结合，或500nM甲基三烯酮用于AR和PR结合，测定非特异性结合。将结合反应（140μL）在4℃温育过夜，然后向每个反应中加入70μl冷的木炭 - 葡聚糖缓冲液（含有每50mL测定缓冲液，0.75g炭和0.25g葡聚糖）。将板在轨道振荡器上在4℃下混合8分钟。然后将板在4℃下以3000rpm离心10分钟。然后将120μL等分试样的结合反应混合物转移到另一个96孔板中，并向每个孔中加入175μLWallacOptiphase Hisafe 3闪烁液。将板密封并使用轨道振动器剧烈摇动。孵育2小时后，使用Wallac MicroBeta计数器[1]对平板计数。
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| 细胞实验 |
将LAPC4和CWR-22Rv1细胞接种在标准培养基中并孵育过夜。用PBS洗涤细胞并置于含有活性炭剥离的FBS的培养基中，10％用于LAPC4或1％/ 10％用于CWR-22Rv1。用载体对照或指定的处理每隔一天用细胞处理指定的时间进行培养：1nM R1881,100nM地塞米松，10μM恩杂鲁胺，100nM米非司酮，1μMCORT118335,1μMCort108297。对于所有实验，将等摩尔载体（乙醇±DMSO）加入每个样品中以获得相同的处理时间。将细胞铺板并处理。在指定的日子，将细胞洗涤，胰蛋白酶消化，沉淀，并重悬于培养基中。然后将细胞与台盼蓝1：1混合，并以盲法计数活细胞。每个时间点每个条件测定三个生物学重复，并报告生物学重复的平均值[2]。
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| 动物实验 |
小鼠[3]将40只10周龄雄性C57BL / 6J小鼠随意喂食含有60％脂肪卡路里的饮食和补充有11％蔗糖的水4周。此外，他们接受以下五种治疗中的一种：Cort108297（80 mg / kg QD），Cort108297（40 mg / kg BID），米非司酮（30 mg / kg BID），罗格列酮，口服血糖药物（10 mg / kg） QD）或载体（在0.5％CMC中的10％DMSO）。另外一个对照组（n = 8）喂食标准饲料和自来水，不接受任何治疗。使用大鼠[4]雄性Sprague Dawley大鼠（250-275g）。将48只大鼠按体重匹配并给予，Cort108297溶于DMSO（30mg / kg sc（n = 10）或60mg / kg sc（n = 10），米非司酮溶于DMSO 10mg / kg sc（n = 10），丙咪嗪溶于生理盐水10mg / kg ip（n = 10）或载体DMSO sc（n = 4）或生理盐水ip（n = 4）。对照组由皮下（sc）和腹膜内（ip）组成控制给药途径以及DMSO和盐水以控制化合物对神经内分泌和行为应激反应的任何潜在差异。
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| 参考文献 |
[1]. Sindelar DK, et al. LLY-2707, a novel nonsteroidal glucocorticoid antagonist that reduces atypical antipsychotic-associated weight gain in rats. J Pharmacol Exp Ther. 2014 Jan;348(1):192-201. [2]. Kach J, et al. Selective Glucocorticoid Receptor Modulators (SGRMs) Delay Castrate-Resistant Prostate Cancer Growth. Mol Cancer Ther. 2017 Aug;16(8):1680-1692. [3]. Asagami T, et al. Selective Glucocorticoid Receptor (GR-II) Antagonist Reduces Body Weight Gain in Mice. J Nutr Metab. 2011;2011:235389. [4]. Solomon MB, et al. The selective glucocorticoid receptor antagonist CORT 108297 decreases neuroendocrine stress responses and immobility in the forced swim test. Horm Behav. 2014 Apr;65(4):363-71.
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