4-[4-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-6-[1-(甲基磺酰基)环丙基]-2-嘧啶基]-1H-吲哚

• 常用名: 4-[4-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-6-[1-(甲基磺酰基)环丙基]-2-嘧啶基]-1H-吲哚
• 英文名: AZ20
• CAS号: 1233339-22-4
• 分子量: 412.505
• 密度: 1.4±0.1 g/cm3
• 沸点: 634.6±55.0 °C at 760 mmHg
• 分子式: C₂₁H₂₄N₄O₃S
• 熔点: N/A
• 闪点: 337.6±31.5 °C
• 符号: GHS07
• 信号词: Warning

用途

AZ20 是一种有效的,选择性的 ATR 抑制剂,IC50 值为 5 nM；同时可抑制 mTOR 活性,IC50 值为 38 nM。

名称

• 中文名: 4-[4-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-6-[1-(甲基磺酰基)环丙基]-2-嘧啶基]-1H-吲哚
• 英文名: (3R)-4-[2-(3H-indol-4-yl)-6-(1-methylsulfonylcyclopropyl)pyrimidin-4-yl]-3-methylmorpholine

生物活性

• 描述: AZ20 是一种有效的,选择性的 ATR 抑制剂,IC50 值为 5 nM；同时可抑制 mTOR 活性,IC50 值为 38 nM。
• 相关类别:
  信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> ATM/ATR
  信号通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信号通路 >> ATM/ATR
  研究领域 >> 癌症
• 靶点:

  ATR:5 nM (IC50)

  mTOR:38 nM (IC50)

  PI3Kα:13000 nM (IC50)

• 体外研究: AZ20抑制ATR从HeLa核提取物中免疫沉淀,IC50为5 nM,ATR介导HT29结直肠腺癌肿瘤细胞中Chk1的磷酸化,IC50为50 nM [1]。
• 体内研究: AZ20(25,50mg/kg,口服)具有高渗透性和对大鼠肝细胞的良好稳定性,并且尽管在获得显着更高的溶解度方面缺乏进展,但在低剂量大鼠PK研究中具有可观的生物利用度。 AZ20(25,50 mg/kg,po)在携带LoVo肿瘤的雌性裸鼠中导致显着的肿瘤生长抑制[1]。
• 激酶实验: 用于体外酶测定的ATR通过用以下缓冲液中含有的ATR的氨基酸400-480的兔多克隆抗血清进行免疫沉淀从HeLa核提取物获得：25mM HEPES（pH 7.4），2mM MgCl 2,250mM NaCl，0.5mM EDTA，0.1mM Na 3 VO 4,10％v / v甘油和0.01％v / v吐温20.通过与蛋白A-Sepharose珠孵育1小时然后通过离心从核提取物中分离ATR-抗体复合物。恢复珠子。在96孔板的孔中，将含有10μL含ATR的Sepharose珠与1μg底物谷胱甘肽S-转移酶-p53N66（与谷胱甘肽S-转移酶融合的p53的NH2-末端66个氨基酸）在E.中表达。大肠杆菌在ATR测定缓冲液（50 mM HEPES（pH 7.4），150 mM NaCl，6 mM MgCl 2,4 mM MnCl 2,0.1 mM Na3VO4,0.1 mM DTT和10％（v / v）甘油）中于37°C in是否存在抑制剂。在轻微摇动10分钟后，加入ATP至终浓度为3μM，并使反应在37℃下继续另外1小时。通过加入100μLPBS终止反应，并将反应物转移至涂有白色不透明谷胱甘肽的96孔板中，并在4℃温育过夜。然后将该板用PBS / 0.05％（v / v）吐温20洗涤，印迹干燥，并通过标准ELISA技术用磷酸丝氨酸15p53抗体分析。磷酸化谷胱甘肽S-转移酶-p53N66底物的检测与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶偶联的二抗组合进行。增强的化学发光溶液用于产生信号，化学发光检测通过TopCount读板器进行。然后将得到的计算的％酶活性用于测定化合物的IC 50值（IC 50作为抑制50％酶活性的浓度）。
• 细胞实验: 通过使用Labcyte Echo声学分配仪器在100％DMSO中稀释然后进一步进入测定培养基（EMEM，10％FCS，1％谷氨酰胺）来产生化合物剂量范围。将细胞以9×10 4个细胞/ mL接种于384孔Costar板中，在40μLEMEM，10％FCS，1％谷氨酰胺中培养24小时。加入化合物后，将细胞温育60分钟。然后使用Labcyte Echo添加终浓度为3μM的4NQO（在100％DMSO中制备），并将细胞再温育60分钟。通过添加40μL的3.7％v / v甲醛溶液将细胞固定20分钟。去除固定后，用PBS洗涤细胞并在含有0.1％Triton X-100的40μLPBS中透化。然后洗涤细胞，并加入15μL一抗溶液（pChk1 Ser345）。将板在4℃温育过夜。然后洗去第一抗体，并在室温下加入20μL第二抗体溶液和1μMHoechst33258 90分钟。将板洗涤并留在40μLPBS中。然后在ArrayScan VTI仪器上读取平板以确定染色强度，并获得剂量响应并用于确定化合物的IC 50值。
• 动物实验: 雌性Swiss nu / nu小鼠饲养在负压隔离器中。通过在左背侧皮下注射1×107个肿瘤细胞（100μL无血清培养基），在8至12周龄小鼠中建立LoVo肿瘤异种移植物。当肿瘤变得可触知时，将动物随机分入治疗组。 AZ20在10％DMSO / 40％丙二醇/ 50％水中制备并口服给药。用卡尺每周测量肿瘤最多三次。计算肿瘤体积，并使用每组的几何平均值对时间绘制数据。
• 参考文献:

  [1]. Foote KM, et al. Discovery of 4-{4-[(3R)-3-Methylmorpholin-4-yl]-6-[1-(methylsulfonyl)cyclopropyl]pyrimidin-2-yl}-1H-indole (AZ20): a potent and selective inhibitor of ATR protein kinase with monotherapy in vivo antitumor activity. J Med Chem. 2013 Mar 14

物理化学性质

• 密度: 1.4±0.1 g/cm3
• 沸点: 634.6±55.0 °C at 760 mmHg
• 分子式: C₂₁H₂₄N₄O₃S
• 分子量: 412.505
• 闪点: 337.6±31.5 °C
• 精确质量: 412.156921
• PSA: 93.13000
• LogP: 0.50
• 外观性状: 粉末
• 蒸汽压: 0.0±1.9 mmHg at 25°C
• 折射率: 1.687
• 储存条件: -20℃

安全信息

• 符号: GHS07
• 信号词: Warning
• 危害声明: H302
• 警示性声明: P301 + P312 + P330
• 危险品运输编码: NONH for all modes of transport

英文别名

• 1H-Indole, 4-[4-[(3R)-3-methyl-4-morpholinyl]-6-[1-(methylsulfonyl)cyclopropyl]-2-pyrimidinyl]-
• 4-{4-[(3R)-3-Methyl-4-morpholinyl]-6-[1-(methylsulfonyl)cyclopropyl]-2-pyrimidinyl}-1H-indole
• AZ20