描述 |
Phen-DC3 Trifluoromethanesulfonate 是一个 G4 特异性配体,可以抑制解旋酶 FANCJ 和 DinG 且 IC50s 值分别为 65±6 和 50±10 nM。
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相关类别 |
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靶点 |
IC50: 65±6 nM (G4 substrate, FANCJ helicase), 50±10 nM (G4 substrate, DinG helicases)[1]
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体外研究 |
在WT细胞中,CEB1-WT阵列相当稳定,但在加入10μMPIN-DC3三氟甲磺酸酯(Phen-DC3)后经历频繁重排。发现c-Myc等位基因在Phen-DC3三氟甲磺酸盐处理和PIF1缺失时表现出显着的去稳定化。 CEB25-L111(T)阵列在WT细胞中是稳定的,在加入Phen-DC3三氟甲磺酸盐或PIF1缺失后变得不稳定。在Phen-DC3三氟甲磺酸盐存在下或在不存在PIF1的情况下,它也是高度不稳定的。 CEB1环CEB25等位基因在PIF1处理的和WT细胞中完全稳定[2]。
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细胞实验 |
简而言之,未处理的WT细胞和来自新鲜细胞的pif1Δ细胞来自具有亲本等位基因大小的单个菌落稀释在5mL YPD(2×10 5个细胞/ mL)中,在30℃下振荡生长8代。 ,并在YPD平板上作为单个菌落传播。为了测量Phen-DC3三氟甲磺酸盐处理后的小卫星不稳定性,来自YPD上的新鲜贴片的WT细胞在30℃下在含有10μM的Phen-DC3三氟甲磺酸酯的液体SC中生长8代。使用在小卫星每侧切割的EcoRI消化,通过Southern印迹分析分离的菌落或菌落库[2]。
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参考文献 |
[1]. Sanjay Kumar Bharti, et al. Specialization among Iron-Sulfur Cluster Helicases to Resolve G-quadruplex DNA Structures That Threaten Genomic Stability. J Biol Chem. 2013 Sep 27; 288(39): 28217–28229. [2]. Aurèle Piazza, et al. Short loop length and high thermal stability determine genomic instability induced by G-quadruplex-forming minisatellites. EMBO J. 2015 Jun 12; 34(12): 1718–1734.
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