盐酸巴多昔芬_LY2784544_Gandotinib_生物活性和实验方法
发布时间：2018-10-20 21:22:59 编辑作者：活性小子
图片：盐酸巴多昔芬结构式
盐酸巴多昔芬（LY2784544）是一种有效的 JAK2 抑制剂，IC50 为 3 nM。LY2784544 也抑制FLT3，FLT4，FGFR2，TYK2 和 TRKB，IC50 分别为 4，25，32，44 和 95 nM。
一、盐酸巴多昔芬的生物活性：
1）体外活性
LY2784544，一种有效的，选择性和ATP竞争性的janus激酶2（JAK2）酪氨酸激酶抑制剂。 LY2784544有效抑制Ba / F3细胞中JAK2V617F驱动的信号传导和细胞增殖（IC50分别为20和55nM）。 相比之下，LY2784544在抑制白细胞介素-3刺激的野生型JAK2介导的信号传导和细胞增殖方面的效力要小得多（IC50分别为1183和1309nM）。 LY2784544有效抑制JAK2V617F信号传导（IC50 = 20 nM），但显着地显示出对IL-3激活的野生型JAK2信号传导的非常小的活性，IC50为1183 nM。 LY2784544抑制表达JAK2V617F的细胞的增殖（IC50 = 55nM），并且作为IL-3刺激的表达野生型JAK2的Ba / F3细胞增殖的抑制剂（IC50 = 1309nM）显着降低效力。 LY2784544在基于细胞的TF-1 JAK2测定中有效（IC50 = 45 nM），并且在NK-92 JAK3 / JAK1异二聚体测定（942 nM）中具有所需的阈值选择性[1]。在增殖实验中， LY2784544对JAK2 V617F驱动的细胞具有抗增殖效应（IC50：68 nM）；对野生型JAK2驱动细胞的IC50为1356 nM；对JAK3驱动细胞的IC50为940 nM。LY2784544对IL-3激活的野生型JAK2也有抑制作用（IC50：2.26 μM）。
2）体内活性
LY2784544有效抑制Ba / F3-JAK2V617F-GFP（绿色荧光蛋白）腹水肿瘤细胞（TED50 = 12.7 mg / kg）中的STAT5磷酸化，并显着降低（P <0.05）JAK2V617F中Ba / F3-JAK2V617F-GFP肿瘤负荷 诱导MPN模型（TED50 = 13.7 mg / kg，每日两次）[1]。作用于在患有重症联合免疫缺陷小鼠的脾脏中，LY2784544（p.o.）不影响CD71/Ter119 阳性红系祖细胞。LY2784544对Ba/F3-JAK2 V617F-GFP移植瘤中的STAT5磷酸化有显著抑制效果（TED50：12.7 mg/kg）。在JAK2 V617F诱导的MPN模型中，LY2784544（p.o.）还减少Ba/F3-JAK2 V617F-GFP肿瘤负担（TED50：13.7 mg/kg）。
二、盐酸巴多昔芬的实验方法：
1）细胞实验
将LY2784544溶解于DMSO中并储存，然后在使用前用适当的培养基稀释[1]。 将表达JAK2V617F的Ba / F3细胞置于含RPMI-1640的载体（DMSO）或LY2784544（浓度范围0.001-20μM）（1×104细胞/ 96孔）中。 除了添加IL-3（2ng / mL）之外，类似地处理表达野生型JAK2的Ba / F3细胞。 孵育72小时后，通过加入Cell Titer 96 Aqueous One Solution Reagent（20μL/孔）评估细胞增殖。 使用GraphPad Prism 4软件[1]计算抑制细胞增殖的IC 50。
2）动物实验
小鼠-通过测量小鼠腹水肿瘤模型中STAT5磷酸化的抑制来评估JAK2V617F信号传导的剂量和时间依赖性体内抑制。将Ba / F3-JAK2V617F-GFP细胞（1×107）植入严重联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）的腹腔内，并使其发展成腹水肿瘤7天。对于剂量反应研究（6只动物/组），LY2784544通过口服强饲法（2.5,5,10,20,40或80 mg / kg）给药一次，然后30分钟后，收集，固定，收集腹水肿瘤细胞，用Mouse-anti-pSTAT5（pY694）Alexa Fluor 647（1:10稀释）孵育2小时，并通过流式细胞术分析。时间过程研究类似地进行，除了动物用20,40或80mg / kg的LY2784544处理，并且在给药后以0.25-6小时的预定间隔收集腹水肿瘤细胞。通过单因素方差分析和Dunnett检验（α= 0.05）分析数据。使用四参数逻辑曲线拟合程序分析剂量响应数据。
综上所述：盐酸巴多昔芬LY2784544（Gandotinib）是一种有效的JAK2抑制剂（IC50：3 nM），对JAK2V617F有效（Ki：0.245 nM）。 选择性比JAK1和JAK3高8倍和20倍。它的靶点活性为FLT3,4nM；JAK1,19.8nM；JAK2,3nM；JAK2 (V617F),0.245nM(Ki)。
参考文献：
[1]. Ma L, et al. Discovery and characterization of LY2784544, a small-molecule tyrosine kinase inhibitor of JAK2V617F. Blood Cancer J. 2013, 3, e109.
一、盐酸巴多昔芬的生物活性：
1）体外活性
LY2784544，一种有效的，选择性和ATP竞争性的janus激酶2（JAK2）酪氨酸激酶抑制剂。 LY2784544有效抑制Ba / F3细胞中JAK2V617F驱动的信号传导和细胞增殖（IC50分别为20和55nM）。 相比之下，LY2784544在抑制白细胞介素-3刺激的野生型JAK2介导的信号传导和细胞增殖方面的效力要小得多（IC50分别为1183和1309nM）。 LY2784544有效抑制JAK2V617F信号传导（IC50 = 20 nM），但显着地显示出对IL-3激活的野生型JAK2信号传导的非常小的活性，IC50为1183 nM。 LY2784544抑制表达JAK2V617F的细胞的增殖（IC50 = 55nM），并且作为IL-3刺激的表达野生型JAK2的Ba / F3细胞增殖的抑制剂（IC50 = 1309nM）显着降低效力。 LY2784544在基于细胞的TF-1 JAK2测定中有效（IC50 = 45 nM），并且在NK-92 JAK3 / JAK1异二聚体测定（942 nM）中具有所需的阈值选择性[1]。在增殖实验中， LY2784544对JAK2 V617F驱动的细胞具有抗增殖效应（IC50：68 nM）；对野生型JAK2驱动细胞的IC50为1356 nM；对JAK3驱动细胞的IC50为940 nM。LY2784544对IL-3激活的野生型JAK2也有抑制作用（IC50：2.26 μM）。
2）体内活性
LY2784544有效抑制Ba / F3-JAK2V617F-GFP（绿色荧光蛋白）腹水肿瘤细胞（TED50 = 12.7 mg / kg）中的STAT5磷酸化，并显着降低（P <0.05）JAK2V617F中Ba / F3-JAK2V617F-GFP肿瘤负荷 诱导MPN模型（TED50 = 13.7 mg / kg，每日两次）[1]。作用于在患有重症联合免疫缺陷小鼠的脾脏中，LY2784544（p.o.）不影响CD71/Ter119 阳性红系祖细胞。LY2784544对Ba/F3-JAK2 V617F-GFP移植瘤中的STAT5磷酸化有显著抑制效果（TED50：12.7 mg/kg）。在JAK2 V617F诱导的MPN模型中，LY2784544（p.o.）还减少Ba/F3-JAK2 V617F-GFP肿瘤负担（TED50：13.7 mg/kg）。
二、盐酸巴多昔芬的实验方法：
1）细胞实验
将LY2784544溶解于DMSO中并储存，然后在使用前用适当的培养基稀释[1]。 将表达JAK2V617F的Ba / F3细胞置于含RPMI-1640的载体（DMSO）或LY2784544（浓度范围0.001-20μM）（1×104细胞/ 96孔）中。 除了添加IL-3（2ng / mL）之外，类似地处理表达野生型JAK2的Ba / F3细胞。 孵育72小时后，通过加入Cell Titer 96 Aqueous One Solution Reagent（20μL/孔）评估细胞增殖。 使用GraphPad Prism 4软件[1]计算抑制细胞增殖的IC 50。
2）动物实验
小鼠-通过测量小鼠腹水肿瘤模型中STAT5磷酸化的抑制来评估JAK2V617F信号传导的剂量和时间依赖性体内抑制。将Ba / F3-JAK2V617F-GFP细胞（1×107）植入严重联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）的腹腔内，并使其发展成腹水肿瘤7天。对于剂量反应研究（6只动物/组），LY2784544通过口服强饲法（2.5,5,10,20,40或80 mg / kg）给药一次，然后30分钟后，收集，固定，收集腹水肿瘤细胞，用Mouse-anti-pSTAT5（pY694）Alexa Fluor 647（1:10稀释）孵育2小时，并通过流式细胞术分析。时间过程研究类似地进行，除了动物用20,40或80mg / kg的LY2784544处理，并且在给药后以0.25-6小时的预定间隔收集腹水肿瘤细胞。通过单因素方差分析和Dunnett检验（α= 0.05）分析数据。使用四参数逻辑曲线拟合程序分析剂量响应数据。
综上所述：盐酸巴多昔芬LY2784544（Gandotinib）是一种有效的JAK2抑制剂（IC50：3 nM），对JAK2V617F有效（Ki：0.245 nM）。 选择性比JAK1和JAK3高8倍和20倍。它的靶点活性为FLT3,4nM；JAK1,19.8nM；JAK2,3nM；JAK2 (V617F),0.245nM(Ki)。
参考文献：
[1]. Ma L, et al. Discovery and characterization of LY2784544, a small-molecule tyrosine kinase inhibitor of JAK2V617F. Blood Cancer J. 2013, 3, e109.
相关化合物：盐酸巴多昔芬
上一篇：巴瑞克替尼的生物活性和实验方法