鹰嘴豆芽素A的生物活性_鹰嘴豆芽素A的实验方法
发布时间：2018-10-21 12:48:25 编辑作者：活性达人
图片：鹰嘴豆芽素A结构式
鹰嘴豆芽素A是从红三叶草（Trifolium pratense）分离的具有抗癌特性的异黄酮衍生物。 鹰嘴豆芽素A是天然存在的脂肪酸酰胺水解酶（FAAH）抑制剂。
一、鹰嘴豆芽素A的生物活性详解：
1）体外活性
鹰嘴豆芽素A抑制小鼠，大鼠和人FAAH对0.5μMAEA的水解，IC50分别为1.8,1.4和2.4μM。 鹰嘴豆芽素A抑制FAAH，pIC50值为6.21±0.02，对应的IC50值为0.62μM。 鹰嘴豆芽素A在高纳摩尔 - 低微摩尔浓度下对URB597敏感的氚保留产生显着抑制。 用人FAAH和0.5μM[3H] AEA进行实验，测定条件给出了这些较高的利用率，在微摩尔范围内鹰嘴豆芽素A，染料木黄酮，福莫西汀和大豆苷元仍能抑制活性（IC50为6.0,8.4,12和 分别为30μM）[1]。
2）体内活性
鹰嘴豆芽素A在30,100和300μg的剂量下进行测试。 最高剂量还以AM251拮抗的方式减少福尔马林诱导的ERK磷酸化。 因此，在对爪子局部给药后，鹰嘴豆芽素A表现得像URB597。 在麻醉的小鼠中，URB597（30μg，i.pl。）和鹰嘴豆芽素A（100μg，i.pl。）均抑制由足底内注射福尔马林产生的细胞外信号调节激酶的脊髓磷酸化。 CB1受体拮抗剂/反向激动剂AM251（30μg，i.pl。）显着降低了两种化合物的作用。 鹰嘴豆芽素A（15mg / k i.v.）不会增加脑AEA浓度，但会产生10mg / kg i.v.的适度增强作用。 AEA在四分体测试中。鹰嘴豆芽素A（15 mg / kg i.v.）本身没有效果，但显着增强了AEA（10 mg / kg i.v。）[1]的作用。
二、鹰嘴豆芽素A的实验方法：
1）动物实验
小鼠[1]-ICR小鼠用于测量自发活动（超过10分钟测试期），直肠温度，环固定（超过5分钟测试期）和伤害感受阈值（甩尾测试）的行为测试。 将AEA和鹰嘴豆芽素A溶解于由乙醇，Emulphor-620和生理盐水组成的载体中，比例为1：1：18v / v，并静脉内给药。 通过尾静脉给动物注射（注射体积10μL/ g体重）。 抗伤害感受程度表示为最大可能效应的百分比（％MPE），定义为[（测试控制时间）/（10-控制时间）]×100。
2）激酶实验
对于使用FAAH的实验，使用大鼠肝匀浆，小鼠脑匀浆和来自用人酶转染的COS7细胞的膜。将来自成年C57BL / 6小鼠的冷冻（-80℃）肝脏和来自成年Wistar或Sprague-Dawley大鼠的冷冻脑（负小脑）解冻并在20mM HEPES，1mM MgCl 2，pH7中匀浆。将匀浆物于37℃离心。在4℃下~35000×g，20分钟。在缓冲液中再悬浮，然后再次离心并在缓冲液中再次重悬后，将沉淀物在37℃下孵育15分钟。进行该温育以水解所有内源FAAH底物。然后将匀浆物如上所述离心，再离心并重悬于含有1mM EDTA和3mM MgCl 2的50mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中。然后将匀浆在等分试样中于-80℃冷冻直至用于测定。使用0.5μM（除非另有说明）在分子的乙醇胺部分中标记的[3H] AEA，在匀浆和COS7细胞膜中测定FAAH。通过使用缓冲液而不是匀浆物获得空白值。在比较鹰嘴豆芽素A对FAAH和FAAH-2的影响的实验中，使用相同的测定但是使用16nM [3H]油酰乙醇酰胺（[3H] OEA）作为底物并且在室温下具有孵育阶段。对于FAAH-2，OEA而不是AEA的选择取决于水解的相对速率：OEA通过FAAH-2代谢比AEA快四倍，而对于FAAH，OEA的水解速率约为AEA的三分之一。 。当使用0.5μM[3H] AEA作为底物时，选择大鼠脑和小鼠肝脏的测定条件，使得<10％的添加底物被代谢。对于人FAAH样品，在所有情况下<5％的[3H] AEA都被代谢。对于16 nM [3H] OEA，有限供应的昂贵配体意味着不可能进行优化，并且所用底物的量更高（FAAH及其相应的模拟转染分别为34±1和0.5±0.1％; FAAH-2及其相应的模拟转染分别为40±2和21±0.4）[1]。
综上所述：鹰嘴豆芽素A是一种天然存在的脂肪酸酰胺水解酶 (FAAH) 抑制剂，抑制FAAH，作用于小鼠，大鼠，人 FAAH，IC50 分别为 1.8，1.4 和 2.4 μM。它的靶点活性为EGFR,91.5μM；FAAH (human),2.4μM；FAAH (mouse),1.8μM；FAAH (rat),1.4μM。
参考文献：
[1]. Thors L, et al. biochanin A, a naturally occurring inhibitor of fatty acid amide hydrolase. Br J Pharmacol. 2010 Jun;160(3):549-60.
一、鹰嘴豆芽素A的生物活性详解：
1）体外活性
鹰嘴豆芽素A抑制小鼠，大鼠和人FAAH对0.5μMAEA的水解，IC50分别为1.8,1.4和2.4μM。 鹰嘴豆芽素A抑制FAAH，pIC50值为6.21±0.02，对应的IC50值为0.62μM。 鹰嘴豆芽素A在高纳摩尔 - 低微摩尔浓度下对URB597敏感的氚保留产生显着抑制。 用人FAAH和0.5μM[3H] AEA进行实验，测定条件给出了这些较高的利用率，在微摩尔范围内鹰嘴豆芽素A，染料木黄酮，福莫西汀和大豆苷元仍能抑制活性（IC50为6.0,8.4,12和 分别为30μM）[1]。
2）体内活性
鹰嘴豆芽素A在30,100和300μg的剂量下进行测试。 最高剂量还以AM251拮抗的方式减少福尔马林诱导的ERK磷酸化。 因此，在对爪子局部给药后，鹰嘴豆芽素A表现得像URB597。 在麻醉的小鼠中，URB597（30μg，i.pl。）和鹰嘴豆芽素A（100μg，i.pl。）均抑制由足底内注射福尔马林产生的细胞外信号调节激酶的脊髓磷酸化。 CB1受体拮抗剂/反向激动剂AM251（30μg，i.pl。）显着降低了两种化合物的作用。 鹰嘴豆芽素A（15mg / k i.v.）不会增加脑AEA浓度，但会产生10mg / kg i.v.的适度增强作用。 AEA在四分体测试中。鹰嘴豆芽素A（15 mg / kg i.v.）本身没有效果，但显着增强了AEA（10 mg / kg i.v。）[1]的作用。
二、鹰嘴豆芽素A的实验方法：
1）动物实验
小鼠[1]-ICR小鼠用于测量自发活动（超过10分钟测试期），直肠温度，环固定（超过5分钟测试期）和伤害感受阈值（甩尾测试）的行为测试。 将AEA和鹰嘴豆芽素A溶解于由乙醇，Emulphor-620和生理盐水组成的载体中，比例为1：1：18v / v，并静脉内给药。 通过尾静脉给动物注射（注射体积10μL/ g体重）。 抗伤害感受程度表示为最大可能效应的百分比（％MPE），定义为[（测试控制时间）/（10-控制时间）]×100。
2）激酶实验
对于使用FAAH的实验，使用大鼠肝匀浆，小鼠脑匀浆和来自用人酶转染的COS7细胞的膜。将来自成年C57BL / 6小鼠的冷冻（-80℃）肝脏和来自成年Wistar或Sprague-Dawley大鼠的冷冻脑（负小脑）解冻并在20mM HEPES，1mM MgCl 2，pH7中匀浆。将匀浆物于37℃离心。在4℃下~35000×g，20分钟。在缓冲液中再悬浮，然后再次离心并在缓冲液中再次重悬后，将沉淀物在37℃下孵育15分钟。进行该温育以水解所有内源FAAH底物。然后将匀浆物如上所述离心，再离心并重悬于含有1mM EDTA和3mM MgCl 2的50mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中。然后将匀浆在等分试样中于-80℃冷冻直至用于测定。使用0.5μM（除非另有说明）在分子的乙醇胺部分中标记的[3H] AEA，在匀浆和COS7细胞膜中测定FAAH。通过使用缓冲液而不是匀浆物获得空白值。在比较鹰嘴豆芽素A对FAAH和FAAH-2的影响的实验中，使用相同的测定但是使用16nM [3H]油酰乙醇酰胺（[3H] OEA）作为底物并且在室温下具有孵育阶段。对于FAAH-2，OEA而不是AEA的选择取决于水解的相对速率：OEA通过FAAH-2代谢比AEA快四倍，而对于FAAH，OEA的水解速率约为AEA的三分之一。 。当使用0.5μM[3H] AEA作为底物时，选择大鼠脑和小鼠肝脏的测定条件，使得<10％的添加底物被代谢。对于人FAAH样品，在所有情况下<5％的[3H] AEA都被代谢。对于16 nM [3H] OEA，有限供应的昂贵配体意味着不可能进行优化，并且所用底物的量更高（FAAH及其相应的模拟转染分别为34±1和0.5±0.1％; FAAH-2及其相应的模拟转染分别为40±2和21±0.4）[1]。
综上所述：鹰嘴豆芽素A是一种天然存在的脂肪酸酰胺水解酶 (FAAH) 抑制剂，抑制FAAH，作用于小鼠，大鼠，人 FAAH，IC50 分别为 1.8，1.4 和 2.4 μM。它的靶点活性为EGFR,91.5μM；FAAH (human),2.4μM；FAAH (mouse),1.8μM；FAAH (rat),1.4μM。
参考文献：
[1]. Thors L, et al. biochanin A, a naturally occurring inhibitor of fatty acid amide hydrolase. Br J Pharmacol. 2010 Jun;160(3):549-60.
相关化合物：鹰嘴豆芽素A