大黄酚的生物活性_大黄酚的实验方法
发布时间：2018-10-21 13:04:25 编辑作者：活性达人
图片：大黄酚结构式
大黄酚是EGFR / mTOR途径抑制剂，可以在大黄和酢浆草中发现。
一、大黄酚的生物活性详解：
1）体外活性
大黄酚（Chrysophanic Acid）通过抑制EGFR / mTOR途径阻断结肠癌细胞的增殖。大黄酚是一种天然蒽醌，在过量表达EGFR的SNU-C5人结肠癌细胞中具有抗癌活性。 SNU-C5细胞中的大黄酚处理抑制EGF诱导的EGFR磷酸化并抑制下游信号分子的激活，如AKT，细胞外信号调节激酶（ERK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/核糖体蛋白S6激酶（p70S6K） ）。当与mTOR抑制剂雷帕霉素组合时，大黄酚（80和120μM）显着阻断细胞增殖。大黄酚抑制EGF诱导的EGFR磷酸化并抑制AKT和mTOR / p70S6K的活化，并显着阻断细胞增殖。大黄酚剂量依赖性地降低CCK-8和过表达EGFR的SNU-C5细胞的活力。大黄酚处理在Tyr1068下剂量依赖性地降低EGF诱导的EGFR磷酸化。大黄酚（80和120μM）降低了Ser2448处mTOR的磷酸化水平。大黄酚（80和120μM）也降低了Thr389处p70S6K的磷酸化水平。大黄酚抑制EGF诱导的EGFR活化并抑制下游信号分子AKT和mTOR / p70S6K的激活[1]。大黄酚（CA）抑制3T3-L1脂肪细胞中的脂质积累。大黄酚下调3T3-L1脂肪细胞中的脂肪形成因子。大黄酚在原代培养的棕色脂肪细胞中诱导产热因子。大黄酚通过激活AMPK途径抑制脂肪生成并诱导产热[2]。在Buffalo green monkey肾脏细胞中，大黄酚能够抑制Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒诱导产生的细胞病理效应。在EGFR过表达的SNU-C5人类结肠癌细胞中，大黄酚抑制EGFR中EGF诱导的磷酸化，抑制细胞增殖，具有抗癌活性。
2）体内活性
大黄酚（CA）改善C57BL / 6小鼠中HFD诱导的肥胖。 在雄性C57BL / 6J小鼠中进行大黄酚的体内性能以确定施用的大黄酚的功效。 喂食HFD的小鼠比喂食标准饮食小鼠的小鼠体重明显增加。 另一方面，大黄酚组的体重增加显着低于未处理的HFD。 HFD组小鼠体重增加23.92±1.74 g，而大黄酚组16周后体重增加16.72±2 g [2]。
二、大黄酚的实验方法：
1）动物实验
小鼠[2]-在实验前将雄性4周龄C57BL / 6J小鼠维持1周。 在无病原体的动物设施中将小鼠维持在12小时光照/黑暗循环中，随意提供实验室饮食和水。 为了诱导肥胖，给小鼠喂食含有60％kcal％脂肪的HFD。 对照组（C）饲喂商业标准饲料。 HFD组（HFD）小鼠仅用HFD喂养。 HFD加CA组（CA）小鼠在给予大黄酚（5mg / kg /天）之前给予HFD 4周。 将小鼠分成三组（n = 5），喂食饲料，HFD和HFD加大黄酚16周。 每周测量三次体重和食物摄入量。
2）细胞实验
将大黄酚（大黄酚）溶解于DMSO中并储存，然后在使用前用适当的培养基稀释[1]。 将细胞以5×10 3个细胞/ mL接种在96孔微量培养板中并使其附着24小时。 将大黄酚（20,50,80和120μM）以高达120μM的不同浓度添加到培养基中并持续不同的持续时间。 处理后，通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）评估细胞的细胞毒性和/或增殖。 简而言之，高水溶性四唑盐WST-8产生橙色水溶性产物甲。由细胞中的脱氢酶产生的甲dye染料的量与活细胞的数量成正比。向每个孔中加入CCK-8（10μL）并在37℃下孵育3小时，然后通过以下方法评估细胞增殖和细胞毒性。 使用酶标仪测量450nm处的吸光度。每个实验条件使用3个重复的孔[1]。
综上所述：大黄酚是一种天然蒽醌，抑制EGF-诱导的 EGFR 磷酸化，且抑制 AKT 和 mTOR/p70S6K 激活。它的靶点活性为EGFR。
参考文献：
[1]. Lee MS, et al. Chrysophanic acid blocks proliferation of colon cancer cells by inhibiting EGFR/mTOR pathway. Phytother Res. 2011 Jun;25(6):833-7.
[2]. Lim H, et al. Chrysophanic Acid Suppresses Adipogenesis and Induces Thermogenesis by Activating AMP-Activated Protein Kinase Alpha In vivo and In vitro. Front Pharmacol. 2016 Dec 8;7:476.
一、大黄酚的生物活性详解：
1）体外活性
大黄酚（Chrysophanic Acid）通过抑制EGFR / mTOR途径阻断结肠癌细胞的增殖。大黄酚是一种天然蒽醌，在过量表达EGFR的SNU-C5人结肠癌细胞中具有抗癌活性。 SNU-C5细胞中的大黄酚处理抑制EGF诱导的EGFR磷酸化并抑制下游信号分子的激活，如AKT，细胞外信号调节激酶（ERK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/核糖体蛋白S6激酶（p70S6K） ）。当与mTOR抑制剂雷帕霉素组合时，大黄酚（80和120μM）显着阻断细胞增殖。大黄酚抑制EGF诱导的EGFR磷酸化并抑制AKT和mTOR / p70S6K的活化，并显着阻断细胞增殖。大黄酚剂量依赖性地降低CCK-8和过表达EGFR的SNU-C5细胞的活力。大黄酚处理在Tyr1068下剂量依赖性地降低EGF诱导的EGFR磷酸化。大黄酚（80和120μM）降低了Ser2448处mTOR的磷酸化水平。大黄酚（80和120μM）也降低了Thr389处p70S6K的磷酸化水平。大黄酚抑制EGF诱导的EGFR活化并抑制下游信号分子AKT和mTOR / p70S6K的激活[1]。大黄酚（CA）抑制3T3-L1脂肪细胞中的脂质积累。大黄酚下调3T3-L1脂肪细胞中的脂肪形成因子。大黄酚在原代培养的棕色脂肪细胞中诱导产热因子。大黄酚通过激活AMPK途径抑制脂肪生成并诱导产热[2]。在Buffalo green monkey肾脏细胞中，大黄酚能够抑制Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒诱导产生的细胞病理效应。在EGFR过表达的SNU-C5人类结肠癌细胞中，大黄酚抑制EGFR中EGF诱导的磷酸化，抑制细胞增殖，具有抗癌活性。
2）体内活性
大黄酚（CA）改善C57BL / 6小鼠中HFD诱导的肥胖。 在雄性C57BL / 6J小鼠中进行大黄酚的体内性能以确定施用的大黄酚的功效。 喂食HFD的小鼠比喂食标准饮食小鼠的小鼠体重明显增加。 另一方面，大黄酚组的体重增加显着低于未处理的HFD。 HFD组小鼠体重增加23.92±1.74 g，而大黄酚组16周后体重增加16.72±2 g [2]。
二、大黄酚的实验方法：
1）动物实验
小鼠[2]-在实验前将雄性4周龄C57BL / 6J小鼠维持1周。 在无病原体的动物设施中将小鼠维持在12小时光照/黑暗循环中，随意提供实验室饮食和水。 为了诱导肥胖，给小鼠喂食含有60％kcal％脂肪的HFD。 对照组（C）饲喂商业标准饲料。 HFD组（HFD）小鼠仅用HFD喂养。 HFD加CA组（CA）小鼠在给予大黄酚（5mg / kg /天）之前给予HFD 4周。 将小鼠分成三组（n = 5），喂食饲料，HFD和HFD加大黄酚16周。 每周测量三次体重和食物摄入量。
2）细胞实验
将大黄酚（大黄酚）溶解于DMSO中并储存，然后在使用前用适当的培养基稀释[1]。 将细胞以5×10 3个细胞/ mL接种在96孔微量培养板中并使其附着24小时。 将大黄酚（20,50,80和120μM）以高达120μM的不同浓度添加到培养基中并持续不同的持续时间。 处理后，通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）评估细胞的细胞毒性和/或增殖。 简而言之，高水溶性四唑盐WST-8产生橙色水溶性产物甲。由细胞中的脱氢酶产生的甲dye染料的量与活细胞的数量成正比。向每个孔中加入CCK-8（10μL）并在37℃下孵育3小时，然后通过以下方法评估细胞增殖和细胞毒性。 使用酶标仪测量450nm处的吸光度。每个实验条件使用3个重复的孔[1]。
综上所述：大黄酚是一种天然蒽醌，抑制EGF-诱导的 EGFR 磷酸化，且抑制 AKT 和 mTOR/p70S6K 激活。它的靶点活性为EGFR。
参考文献：
[1]. Lee MS, et al. Chrysophanic acid blocks proliferation of colon cancer cells by inhibiting EGFR/mTOR pathway. Phytother Res. 2011 Jun;25(6):833-7.
[2]. Lim H, et al. Chrysophanic Acid Suppresses Adipogenesis and Induces Thermogenesis by Activating AMP-Activated Protein Kinase Alpha In vivo and In vitro. Front Pharmacol. 2016 Dec 8;7:476.
相关化合物：大黄酚