巴氟替尼_作用_生物活性_实验方法
发布时间：2018-10-28 11:43:18 编辑作者：活性达人
图片：巴氟替尼结构式
巴氟替尼(INNO-406)是一种有效、特异的双Bcr-Abl/Lyn抑制剂(IC50:5.8/19nM),对T315I突变体的磷酸化没有抑制作用,对c-Kit和PDGFR的作用较小。
一、巴氟替尼的生物活性详解：
1）体外活性
巴氟替尼分别阻断WT Bcr-Abl自身磷酸化及其下游激酶活性，在K562和293T细胞中IC50分别为11 nM和22 nM。 Bcr-Abl / Lyn：巴氟替尼（1-10μM）浓度依赖性地抑制PAR2-TRPV4偶联。在TRPV4 HEK中，与载体对照相比，10μM巴氟替尼显着抑制对SLIGRL和胰蛋白酶的偶联反应。
巴氟替尼抑制导致PARP激活下游TRPV4通道开放的信号传导途径，最可能是通过阻断酪氨酸激酶的激活。 巴氟替尼分别阻断WT Bcr-Abl自身磷酸化及其下游激酶活性，在K562和293T细胞中IC50分别为11 nM和22 nM。 巴氟替尼有效抑制Bcr-Abl阳性细胞系（包括K562，KU812和BaF3 / wt细胞）的生长，而不影响Bcr-Abl阴性U937细胞系的增殖。
此外，巴氟替尼对Bcr-Abl点突变细胞系（例如BaF3 / E255K细胞）表现出剂量依赖性抗增殖作用。[1]在Bcr-Abl +白血病细胞系中，巴氟替尼通过阻断Bcr-Abl的磷酸化来诱导胱天蛋白酶介导的和不依赖于半胱天冬酶的细胞死亡。[2]
2）体内活性
在Bcr-Abl阳性KU812小鼠模型中，巴氟替尼（0.2mg / kg /天）显着抑制肿瘤生长，并且在20mg / kg /天时完全抑制肿瘤生长而没有副作用。 对于Balb / c小鼠，巴氟替尼显示最大耐受剂量为200mg / kg / d，生物利用度值（BA）为32％。 [1]在携带Ba / F3 / wt bcr-ablGFP，Ba / F3 / Q252H或Ba / F3 / M351T细胞的中枢神经系统（CNS）白血病模型中，联合治疗巴氟替尼（60 mg / kg）和环孢菌素A （CsA）（50mg / kg）导致脑中白血病生长的抑制比单独的巴氟替尼或CsA更显着。[3]
二、巴氟替尼的实验方法：
1）动物实验
动物模型：裸体femice注射K562细胞
2）细胞实验
将K562，BaF3 / wt，BaF3 / E255K和BaF3 / T315I细胞以1×103铺板于96孔板中，而将KU812和U937细胞以5×103铺板于96孔板中。 将细胞与系列稀释的巴氟替尼一起温育3天。 通过MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物; Nacalai Tesque）测定法测量细胞增殖，并通过拟合数据计算50％抑制浓度（IC 50）值。
3）激酶实验
通过使用SignaTECT蛋白酪氨酸激酶测定系统，在25μL含有250μM肽底物，740 Bq /μL[γ-33P] ATP和20μM冷腺苷三磷酸（ATP）的反应混合物中进行Bcr-Abl激酶测定。 每种Bcr-Abl激酶以10nM的浓度使用。 用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒进行Abl，Src和Lyn的激酶测定。 NS-187对79种酪氨酸激酶的抑制作用用KinaseProfiler.ion测定脑中白血病生长比单用巴氟替尼或CsA。[3]
综上所述：巴氟替尼巴氟替尼 (INNO-406) 是一种有效的双重Bcr-Abl/Lyn抑制剂, IC50值为5.8 nM/19 nM。它的靶点活性为Abl,5.8nM；Lyn,19nM。
参考文献：
1. Kimura S, et al. Blood. 2005, 106(12), 3948-3954.
2. Kamitsuji Y, et al. Cell Death Differ. 2008, 15(11), 1712-2172.
3. Yokota A, et al. Blood. 2007, 109(1), 306-314.
一、巴氟替尼的生物活性详解：
1）体外活性
巴氟替尼分别阻断WT Bcr-Abl自身磷酸化及其下游激酶活性，在K562和293T细胞中IC50分别为11 nM和22 nM。 Bcr-Abl / Lyn：巴氟替尼（1-10μM）浓度依赖性地抑制PAR2-TRPV4偶联。在TRPV4 HEK中，与载体对照相比，10μM巴氟替尼显着抑制对SLIGRL和胰蛋白酶的偶联反应。
巴氟替尼抑制导致PARP激活下游TRPV4通道开放的信号传导途径，最可能是通过阻断酪氨酸激酶的激活。 巴氟替尼分别阻断WT Bcr-Abl自身磷酸化及其下游激酶活性，在K562和293T细胞中IC50分别为11 nM和22 nM。 巴氟替尼有效抑制Bcr-Abl阳性细胞系（包括K562，KU812和BaF3 / wt细胞）的生长，而不影响Bcr-Abl阴性U937细胞系的增殖。
此外，巴氟替尼对Bcr-Abl点突变细胞系（例如BaF3 / E255K细胞）表现出剂量依赖性抗增殖作用。[1]在Bcr-Abl +白血病细胞系中，巴氟替尼通过阻断Bcr-Abl的磷酸化来诱导胱天蛋白酶介导的和不依赖于半胱天冬酶的细胞死亡。[2]
2）体内活性
在Bcr-Abl阳性KU812小鼠模型中，巴氟替尼（0.2mg / kg /天）显着抑制肿瘤生长，并且在20mg / kg /天时完全抑制肿瘤生长而没有副作用。 对于Balb / c小鼠，巴氟替尼显示最大耐受剂量为200mg / kg / d，生物利用度值（BA）为32％。 [1]在携带Ba / F3 / wt bcr-ablGFP，Ba / F3 / Q252H或Ba / F3 / M351T细胞的中枢神经系统（CNS）白血病模型中，联合治疗巴氟替尼（60 mg / kg）和环孢菌素A （CsA）（50mg / kg）导致脑中白血病生长的抑制比单独的巴氟替尼或CsA更显着。[3]
二、巴氟替尼的实验方法：
1）动物实验
动物模型：裸体femice注射K562细胞
2）细胞实验
将K562，BaF3 / wt，BaF3 / E255K和BaF3 / T315I细胞以1×103铺板于96孔板中，而将KU812和U937细胞以5×103铺板于96孔板中。 将细胞与系列稀释的巴氟替尼一起温育3天。 通过MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物; Nacalai Tesque）测定法测量细胞增殖，并通过拟合数据计算50％抑制浓度（IC 50）值。
3）激酶实验
通过使用SignaTECT蛋白酪氨酸激酶测定系统，在25μL含有250μM肽底物，740 Bq /μL[γ-33P] ATP和20μM冷腺苷三磷酸（ATP）的反应混合物中进行Bcr-Abl激酶测定。 每种Bcr-Abl激酶以10nM的浓度使用。 用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒进行Abl，Src和Lyn的激酶测定。 NS-187对79种酪氨酸激酶的抑制作用用KinaseProfiler.ion测定脑中白血病生长比单用巴氟替尼或CsA。[3]
综上所述：巴氟替尼巴氟替尼 (INNO-406) 是一种有效的双重Bcr-Abl/Lyn抑制剂, IC50值为5.8 nM/19 nM。它的靶点活性为Abl,5.8nM；Lyn,19nM。
参考文献：
1. Kimura S, et al. Blood. 2005, 106(12), 3948-3954.
2. Kamitsuji Y, et al. Cell Death Differ. 2008, 15(11), 1712-2172.
3. Yokota A, et al. Blood. 2007, 109(1), 306-314.
相关化合物：巴氟替尼