LDN-193189 HCl

LDN193189 Hydrochloride是 BMP 信号传导抑制剂,抑制 ALK1,ALK2,ALK3 和 ALK6 的 IC50 分别为0.8,0.8,5.3,16.7 nM。

信号通路 >> TGF-beta/Smad 信号通路 >> TGF-β受体

研究领域 >> 癌症

IC50: 5 nM (ALK2), 30 nM (ALK3)[1]

LDN-193189以比dorsomorphin更强的效力抑制BMP4介导的Smad1,Smad5和Smad8活化(IC50 = 5 nM对470 nM),同时保留200倍于BMP信号传导与TGF-β信号传导的选择性(TGF-β的IC50≥1,000)纳米)。 LDN-193189有效抑制BMP I型受体ALK2和ALK3的转录活性(IC50分别为5 nM和30 nM),对激活素和TGF-βⅠ型受体ALK4,ALK5和ALK7的作用显着较弱(IC50≥与母体化合物相比,相对于AMP活化的蛋白激酶,PDGFR和MAPK信号传导途径,BMP信号传导的选择性增加(500nM)。 LDN-193189阻断由组成型活性ALK2R206H或ALK2Q207D突变蛋白诱导的转录活性。这些发现表明LDN-193189可能影响BMP诱导的成骨细胞分化。事实上,即使在BMP刺激后12小时施用,LDN-193189也抑制BMP4对C2C12细胞中碱性磷酸酶活性的诱导,表明成骨分化需要持续的BMP信号传导活性[1]。

在第一个实验中,在植入后7天肿瘤变得可触知后,每天两次腹膜内注射LDN-193189(3mg/kg)。对照载体和LDN-193189处理的小鼠之间的生长速率在前5周后没有显着差异,但是在处理后6和7周后检测到生长速率的差异。在第二个实验中,从PCa-118b肿瘤中分离细胞并皮下注射到SCID小鼠(每只小鼠1×10 6个细胞)中。在肿瘤可触知之前,在肿瘤细胞注射后5天将LDN-193189或载体应用于小鼠。通过肿瘤大小测量的这两组之间的平均生长速率的差异在治疗后6周和7周是显着的。在第7周研究结束时,肿瘤重量也显示出显着差异。肿瘤的X射线显示LDN-193189治疗组的肿瘤中异位骨体积和骨密度与对照组相比均降低[2]。来自肺动脉高压(PAH)大鼠的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)与西地那非和LDN-193189的共同孵育完全抑制了骨形态发生蛋白(BMPR2)和Cx40表达的抗增殖和上调。西地那非[3]。

将C2C12细胞以每孔2,000个细胞接种到96孔板中，在补充有2％FBS的DMEM中。用BMP配体和LDN-193189或载体将孔一式四份处理。在培养6天后，在50μLTris缓冲盐水和1％Triton X-100中收集细胞。将裂解物加入到96孔板中的对硝基苯基磷酸酯试剂中1小时，然后评估碱性磷酸酶活性（405nm处的吸光度）。使用Cell Titer Aqueous One（490nm处的吸光度）测量细胞活力，使用与用于碱性磷酸酶测量的那些相同处理的重复孔[1]。

将生长的小鼠PASMC在含有0.3μgId1启动子荧光素酶报告基因构建体（BRE-Luc）和0.6μg表达组成型活性形式的BMP I型受体（caALK2，caALK3或caALK6）的质粒的六孔板中瞬时转染至50％汇合。 ，使用Fugene6。为了评估活化素和TGF-βI型受体功能，用0.3μgPAI1（纤溶酶原激活物抑制剂-1）启动子荧光素酶报告基因构建体（CAGA-Luc）与0.6μg表达I型组成型活性形式的质粒瞬时转染PASMCs。受体（caALK4，caALK5和caALK7）。对于两种报告质粒，使用0.2μgpRL-TKRenilla荧光素酶来控制转染效率。在转染后1小时开始，将PASMC与LDN-193189（2nM-32μM）或载体一起温育。通过双荧光素酶测定试剂盒[1]，通过萤火虫与海肾荧光素酶活性的比例收获细胞提取物并定量相对启动子活性。

小鼠[2]在第一个实验中，SCID小鼠植入MDA-PCa-118b肿瘤。在肿瘤达到可测量的大小7天后，给小鼠注射LDN-193189（3mg / kg）或每天两次腹膜内注射载体。每周测量肿瘤大小和体重。在处死前三天和一天给小鼠注射钙黄绿素。收集血液并称重肿瘤。使用OsteoMeasure分析系统将一部分肿瘤固定在甲醛中用于微型计算机断层扫描（microCT），或使用OsteoMeasure分析系统进一步脱钙用于骨组织形态学分析，或快速冷冻用于RNA制备。通过ELISA测定小鼠血清中的骨钙蛋白。在第二个实验中，首先用Accumax消化PCa-118b肿瘤，将分离的细胞接种过夜，以1：1的比例重悬于基质胶中，并皮下注射到SCID小鼠（1×106细胞/小鼠）中。注射后5天用LDN-193189处理小鼠。大鼠[3]雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，8周龄，体重200-220g，购自南京医科大学动物中心。将大鼠随机分配到七个实验组中的一个（每组n = 6）。在自然12/12小时昼/夜循环下，大鼠可以自由获取食物和水。通过皮下注射到背部区域给予大鼠野百合碱（60mg / kg）。在血液动力学评估后，在研究的第28天收获动物的肺。西地那非组在给予MCT（60mg / kg）后每天接受西地那非的胃内给药。 LDN-193189组每天胃内给予西地那非（50mg / kg）和腹膜内注射LDN-193189（10mg / kg）。在其他组中，给予相同体积的盐水。

[1]. Yu PB, et al. BMP type I receptor inhibition reduces heterotopic [corrected] ossification. Nat Med, 2008, 14(12), 1363-1369.

[2]. Lee YC, et al. BMP4 promotes prostate tumor growth in bone through osteogenesis. Cancer Res, 2011, 71(15), 5194-5203.

[3]. Yang L, et al. Sildenefil increases connexin 40 in smooth muscle cells through activation of BMP pathways in pulmonary arterial hypertension. Int J Clin Exp Pathol. 2014 Jul 15;7(8):4674-84.

SB431542 | Galunisertib (LY2157299) | 3-(6-甲基-2-吡啶基)-N-苯基-4-(4-喹啉基)-1H-吡唑-1-硫代甲酰胺 | 4-[5,6-二氢-2-(2-吡啶)-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基]-7-[2-(4-吗啉)乙氧基]喹啉 | LDN193189 | 2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,5-萘啶 | SB525334 | EW-7197 | 4-[6-[4-异丙氧基苯基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基]喹啉 | 4-[4-[3-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-基]-N-(四氢吡喃-4-基)苯甲酰胺 | LY-364947 | SB-505124 | LY3200882 | LSKL, 血小板反应蛋白抑制剂 (TSP-1) | 4-[1,1'-联苯]-4-基-1,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧代-3-喹啉羧酸乙酯