CWHM-12

CWHM-12 是一种有效的 αV integrins 抑制剂,抑制 αvβ8,αvβ3,αvβ6 和 αvβ1,IC50 分别为 0.2,0.8,1.5 和 1.8 nM。

信号通路 >> 细胞骨架 >> Integrin

研究领域 >> 癌症

IC50: 0.2 nM (αvβ8), 0.8 nM (αvβ3), 1.5 nM (αvβ6), 1.8 nM (αvβ1), 61 nM (αvβ5)[1]

CWHM-12(CWHM 12)也不太有效地抑制αvβ5(IC50 = 61nM)和αIIbβ3/α2β1/α10β1(IC50> 5000nM)。 CWHM-12在体外配体结合试验中表现出对所有五种可能的β亚基结合配偶体(αvβ1,αvβ3,αvβ5,αvβ6和αvβ8)的高效力,对αvβ5的效力略低于其他αv整联蛋白[1]。 。

用CCl4处理小鼠3周以建立纤维化疾病,然后用CWHM-12(CWHM12)或媒介物处理CCl4的最后3周。即使在纤维化疾病确立后,CWHM-12也显着减少肝纤维化。与对照相比,数字图像定量显示CWHM-12处理的小鼠的肝脏中p-SMAD3信号传导显着降低,证明在CWHM-12处理的小鼠中观察到的对CCl4诱导的肝纤维化的保护至少部分是由于αv整合素激活TGF-β。此外,CWHM-12的使用显着抑制肺纤维化的进展[1]。

使用纯化的重组人整联蛋白，使用无细胞受体 - 配体相互作用测定法测量整联蛋白αvβ1，αvβ8，α2β1和α10β1的功能。使用的配体是用于αvβ1的人纤连蛋白，用于αvβ8的人LAP，用于α2β1的牛胶原蛋白II和用于α10β1的鼠层粘连蛋白I.将96孔板用预定的最佳配体浓度包被过夜，用TBS +++（25mM Tris pH7.4,137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM MgCl 2,1mM MnCl 2,1mM CaCl 2）洗涤3次，并用TBS +++ / 1％BSA。将纯化的整联蛋白在含或不含化合物（例如CWHM-12）的TBS +++ / 0.1％BSA中稀释，并根据标准模板将溶液加入洗涤的配体包被的板的空孔中，每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用TBS +++洗涤3次。应用针对αv亚基（αvβ1，αvβ8测定）或β1亚基（α2β1，α10β1测定）的生物素标记的抗体1小时。将板用TBS / 0.1％BSA洗涤3次。将链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶加入孔中，并将板在室温下温育20分钟。在3X TBS +++洗涤后，使用链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶和TMB底物检测结合的整联蛋白，在650nm处测量吸光度。为了测定αIIbβ3（IIbIIIa）功能，将板用纯化的人整联蛋白包被过夜，用TBS +++洗涤3次，并用TBS +++ / 1％BSA封闭。将Alexa Fluor647标记的纯化的人纤维蛋白原在含或不含化合物的TBS +++ / 0.1％BSA中稀释，并将溶液加入到整联蛋白包被的平板中。温育2小时后，将板用TBS +++洗涤3次，并通过在640 / 668nm处测量的吸光度检测结合的配体。对于所有测定，通过非线性回归分析构建浓度 - 响应曲线，并使用GraphPad Prism软件[1]计算IC 50值。

将过表达人αvβ3或αvβ5的稳定转染的人293细胞在含有200μMMnCl2的HBSS缓冲液中于37℃与3倍稀释的化合物（例如，CWHM-12）预孵育30分钟。然后将每个样品加入96孔板的一式三份孔中，所述孔在4℃下用预定的最佳浓度的纯化的玻连蛋白包被过夜，洗涤，与BSA孵育1小时，并再次洗涤。使细胞在37℃下附着30分钟，并通过洗涤除去非粘附细胞。使用对硝基苯磷酸盐通过内源碱性磷酸酶活性测量剩余的附着细胞，并读取405nM的吸光度信号。使用相同的方法测量表达αvβ6的人HT-29细胞与纯化的人潜伏期相关肽和表达α5β1的人K562细胞与人血浆纤连蛋白的粘附。在所有基于细胞的测定中，通过测试相应的同种型匹配的阳性（功能阻断）和阴性对照抗体[1]的活性来验证预期的整联蛋白的结合。

小鼠[1]使用mTmG（Td番茄/ EGFP）和Ai14（Rosa-CAG-LSL-tdTomato-WPRE）小鼠并与Pdgfrb-Cre小鼠杂交。使用野生型C57 / BL6小鼠，Itgavflox / flox小鼠和itgb8flox / flox小鼠。用于所有实验的小鼠是8-12周龄，并且在特定的无病原体条件下饲养。对于所有研究，将CWHM-12和CWHM-96溶解于50％DMSO（在无菌水中）中并投配至100mg / kg /天。药物或媒介物（50％DMSO）通过可植入的ALZET渗透微型泵递送。对于CCl4诱导的纤维化，在第一剂CCl4（预防性）之前或治疗3周后（治疗性）皮下插入泵，并在6周后收获肝脏。对于博来霉素诱导的纤维化泵，在用博来霉素或盐水处理后14天插入，并在28天收获肺（仅治疗）。

[1]. Henderson NC, et al. Targeting of αv integrin identifies a core molecular pathway that regulates fibrosis in several organs. Nat Med. 2013 Dec;19(12):1617-24.

西仑吉肽 | 环(-RGDfK) | 精-甘-天冬-丝氨酸 | ILK-IN-1游离态 | E7820 | GLPG0187 | Firategrast | ATN-161三氟乙酸盐 | 葫芦素B | 依替巴肽 | iRGD肽 | 立他司特 | N-(2-溴-3-氧代螺[3.5]壬-1-烯-1-基)-4-(2,7-萘啶-1-基氨基)-L-苯基丙氨酸 | GSK 3008348盐酸盐 | (S)-2-(2,6-二氯苯酰胺)-3-(2,6-二甲氧基-[1,1-联苯]-4-基)丙酸