Centrinone-B

Centrinone-B 是一种有效的,高度选择性的 PLK4 抑制剂,Ki 值为 0.59 nM。

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> Polo样激酶(PLK)

研究领域 >> 癌症

PLK4:0.59 nM (Ki)

PLK4 (G95L):497.53 nM (Ki)

Aurora A:1239 nM (Ki)

Aurora B:5597.14 nM (Ki)

Centrinone-B是一种有效且高选择性的PLK4抑制剂,Ki为0.59 nM。 Centrinone-B与Aurora A和Aurora B轻微结合,Kis为1239 nM和5597.14 nM。在体外,Centrinone B对Aurora A/B的Plk4选择性> 1000倍,并且在消耗中心体的浓度下不影响细胞Aurora A或B底物磷酸化[1]。除了p53突变体SK-MEL-28之外,Centrinone B(0-200nM)显着降低PLK4-中心粒连合黑素瘤细胞系的细胞活力,并且这种效果是通过抑制PLK4。 Centrinone B对PLK4的抑制也诱导人黑色素瘤细胞凋亡[2]。

所有激酶测定均在白色384孔板中进行。 Plk4测定使用等体积的：（1）纯化的6xHis标记的人Plk4激酶结构域（aa 2-275）（在大肠杆菌中表达并通过Ni-NTA亲和层析纯化）在20mM Tris pH 7.5,100mM NaCl中， 10％甘油，1mM DTT; （2）2X反应缓冲液，由50mM HEPES pH 8.5,20mM MgCl 2,1mM DTT，0.2mg / mL BSA，16μMATP和200μMA-A11底物（氨基酸序列：TPSDSLIYDDGLS）组成。最终反应中的Plk4浓度为2.5-10nM，最终pH为8.0。从DMSO储液中加入以剂量反应排列的抑制剂。使反应在25℃下进行4-16小时。使用ADP-Glo试剂进行检测。在Infinite M1000读板器上测量发光。使用Prism拟合数据，并根据IC50数据计算Kis [1]。

使用CytoTox-Glo测定法测定着丝蛋白B对黑素瘤细胞系和正常黑素细胞活力的影响。简言之，计数细胞并接种于96孔板中，第二天，用centrinone B处理48小时，然后用AAF-Glo底物（丙氨酰 - 丙氨酰苯丙氨酰 - 氨基荧光素）孵育15分钟，这确定了不同的细胞内蛋白酶。通过发光信号与细胞毒性（死细胞蛋白酶）相关的活性。通过从总死细胞中减去死细胞的发光信号（由于中心蛋白B）（在加入洋地黄皂苷以裂解剩余的活细胞后）来确定细胞活力。数据表示为活细胞的相对光单位（RLU）[2]。

[1]. Wong YL, et al. Cell biology. Reversible centriole depletion with an inhibitor of Polo-like kinase 4. Science. 2015 Jun 5;348(6239):1155-60.

[2]. Denu RA, et al. Centriole Overduplication is the Predominant Mechanism Leading to Centrosome Amplification in Melanoma. Mol Cancer Res. 2018 Jan 12.

伏拉塞替 | BI 2536 | Centrinone | 瑞格色替钠 | CFI-400945自由基 | GSK-461364 | 3-[2-(三氟甲基)苄氧基]-5-(5,6-二甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-2-噻吩甲酰胺 | TAK-960 | NMS-1286937 | Poloxin | (2Z)-2-氰基-N-(2,5-二溴苯基)-3-羟基-2-丁烯酰胺 | Ro3280 | 2-[[5-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-甲基-3-吡啶基]氨基]-5,7-二氢-9-(三氟甲基)- 6H-嘧啶并[5,4-D][1]苯并氮杂卓-6-硫酮 | N-[[4-[(6-氯-3-吡啶基)甲氧基]-3-甲氧基苯基]甲基]-3,4-二甲氧基苯乙胺盐酸盐 | (E)-4-[2-[2-[N-乙酰基-N-[(4-甲氧基苯基)磺酰]氨基]苯基]乙烯基]吡啶 1-氧化物