贝母素乙制备
供试品溶液的制备
取供试品适量,去糖衣,研细,过筛,取l0g,精密称定,加适量硅藻土混合,
加7-l0μL浓氨水湿润,置于100mL量瓶中,加混合溶液乙醚-氯仿-乙醇(25:8:2.5)50mL,混匀,超声处理30min,冷浸过夜,过滤,滤渣用混合溶液(同上)10mL冲洗三次,合并滤液和洗液,自然挥干,加氯仿少许使残渣溶解并定容至2mL,摇匀,作为试品溶液,同法制备不含贝母的阴性对照液。
注:“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.25~0.5mm)取下涂好薄层的玻板,于室温下,置水平台上晾干,在反射光及透射光下检视,表面应均匀,平整,无麻点、无气泡、无破损及污染,于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用,或用商品预制板。
点样 吸取上述三种溶液(对照品、供试品、阴性对照品)各4μL、10μL、10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,如用点样器点样到薄层板上,一般为圆点,点样基线距底边1.0~1.5cm,样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况,以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,以石油醚-醋酸乙酯-甲醇-浓氨水(10:10:2:1)为展开剂,饱和30min,上行展开l0cm,取出,晾干,完全挥去溶媒后,喷以碘化铋钾试液显色,晾干。供试品与对照品在薄层色谱相应的位置上,显相同的黄色斑点;阴性对照品与对照品在薄层色谱相应的位置上不出现斑点。
标准曲线的制备 分别吸取对照品溶液2,4,5,6,8μL分别点于同一薄层板上,按上述薄层层析条件,展开、显色、扫描,以贝母素乙点样量对斑点面积积分值绘制标准曲线,进行直线回归,得到回归方程。