| 描述 |
GW-1100 是一种选择性的 GPR40 拮抗剂,pIC50 为 6.9,GW1100 也用作 GPR40 反向激动剂。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
pIC50: 6.9 (GPR40)[1]
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| 体外研究 |
GW-1100(GW1100)剂量依赖性地抑制由GW9508和亚油酸刺激的GPR40介导的Ca2 +升高(pIC50值分别为5.99±0.03和5.99±0.06)。浓度为1μM的GW-1100产生浓度-响应曲线向GW9508的显着右移(在没有pEC50 = 7.17±0.08且在1μMGW-1100存在下pEC50 = 6.79±0.09; P <0.05 ; n = 3)。在GW-1100的浓度为3μM和更高时,观察到最大响应的显着降低,其中pEC50响应继续向右移动[2]。 GW-1100(GW1100)减少CHAR-K1/bFFAR1细胞和嗜中性粒细胞中FFAR1配体诱导的细胞内钙。将CHO-K1/bFFAR1细胞与10μMGW1100或载体(0.1％DMSO)孵育15分钟,然后用载体,油酸,亚油酸或GW9508刺激。 GW-1100显着降低300μM油酸诱导的细胞内钙增加(AUC(60-150 s),p <0.05),100μM亚油酸(AUC(60-150 s),p <0.05)和10μM GW9508(AUC(60-150 s),p <0.05)[3]。
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| 体内研究 |
侧脑室注射DHA(50μg)和GW9508(1.0μg),GPR40选择性激动剂,在第7天显着降低机械异常性疼痛和热痛觉过敏,但在CFA注射后第1天显着降低。用GPR40拮抗剂GW-1100(10μg)进行脑室内预处理可以抑制这些作用[4]。
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| 细胞实验 |
CHO-K1 / bFFAR1或CHO-K1 / pcDNA3.1细胞（2×106细胞/ 2mL）在记录缓冲液（10mM HEPES，140mM NaCl，2mM CaCl2，加入2.5μMFura-2AM荧光指示剂染料）中加载。 21mM MgCl 2,25mM KCl，10mM葡萄糖，pH 7.4）30分钟，用记录缓冲液洗涤三次，并返回培养箱10分钟。将细胞与不同浓度的丙酸（1,10和30mM），油酸（0-500μM），亚油酸（0-200μM），GW9508（0-100μM），离子霉素（2μM）一起温育，毒胡萝卜素（2μM）或载体（0.1％DMSO）。在所有实验中使用的脂肪酸浓度在健康和围产期奶牛的浓度范围内。在另一组实验中，将细胞与10μMGW-1100孵育15分钟，2μMU73122孵育3分钟或载体（0.1％DMSO）孵育15分钟，然后用300μM油酸，100μM亚油酸刺激。或10μMGW9508。使用LS55分光荧光计在340/380nm双波长激发下在509nm发射下测量细胞荧光（Ca 2+）。在持续搅拌下，比色杯温度保持在37℃[3]。
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| 动物实验 |
小鼠[4]将雄性ddY小鼠（年龄，4周）圈养在23-24℃的笼子中，12小时光照 - 黑暗循环（灯光从上午8点到晚上8点）和食物和自由潜水。将DHA（50μg/小鼠），选择性GPR40-激动剂GW9508（1.0-25μg/小鼠）和GPR40拮抗剂GW1100（1-10μg/小鼠）溶解于1％DMSO中，并在von之前用盐水稀释该溶液。 Frey测试（1％DMSO终浓度）。 GW9508的剂量是根据我们之前的出版物选择的，而GW-1100是根据之前的报告和我们的初步实验选择的。在非麻醉状态下，在CFA注射前10分钟通过脑室内（icv）途径施用DHA和GW9508，并且在GW9508注射前10分钟通过icv途径施用GW1100。在CFA处理后，Flavopiridol（5和15nmol /小鼠），一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，通过icv注射给予小鼠的左侧脑室，每天两次（9:00和19:00）。
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| 参考文献 |
[1]. Stoddart LA, et al. Uncovering the pharmacology of the G protein-coupled receptor GPR40: high apparent constitutive activity in guanosine 5'-O-(3-[35S]thio)triphosphate binding studies reflects binding of an endogenous agonist. Mol Pharmacol. 2007 Apr;71( [2]. Briscoe CP, et al. Pharmacological regulation of insulin secretion in MIN6 cells through the fatty acid receptor GPR40: identification of agonist and antagonist small molecules. Br J Pharmacol. 2006 Jul;148(5):619-28. [3]. Manosalva C, et al. Cloning, identification and functional characterization of bovine free fatty acid receptor-1 (FFAR1/GPR40) in neutrophils. PLoS One. 2015 Mar 19;10(3):e0119715. [4]. Nakamoto K, et al. Hypothalamic GPR40 signaling activated by free long chain fatty acids suppresses CFA-induced inflammatorychronic pain. PLoS One. 2013 Dec 12;8(12):e81563.
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