| 描述 |
Umeclidinium bromide 是一种 mAChR 拮抗剂。Umeclidinium bromide 作用于克隆的人 M1-M5 mAChRs,Ki 为 0.05 到 0.16 nM。
|
| 相关类别 |
|
| 靶点 |
Ki: 0.16 nM (M1 mAChR), 0.15 nM (M2 mAChR), 0.06 nM (M3 mAChR), 0.05 nM (M4 mAChR), 0.13 nM (M4 mAChR)[1]
|
| 体外研究 |
在人胚肾293细胞中,Umeclidinium bromide(GSK573719A)以浓度依赖性方式抑制人类醚-a-go-go相关基因通道尾电流(IC50 =9.4μM)[1]。 Umeclidinium bromide,以前称为GSK573719,是一种新型的高亲和力特异性mAChR拮抗剂。它是一种有效的药物,在克隆的人M3 mAChRs和分离的人支气管中的内源性mAChR中表现出缓慢的功能可逆性[2]。
|
| 体内研究 |
当Umeclidinium bromide(GSK573719A)每天一次给予小鼠连续5天(鼻内0.025μg)时,第5天的抑制水平适度增加,高于单次给予相同小鼠后的水平(60％对35％,分别)。在给药第五天后,将小鼠再静置5天,使支气管动力基调恢复到基线水平。在第六天,小鼠接受最后一剂拮抗剂并再次用Mch攻击。抑制水平基本上与测试第一天发现的相同,表明重复鼻内递送Umeclidinium溴化物时耐受性不明显。相比之下,当Umeclidinium bromide以100倍于ED50值(鼻内)的剂量口服(2.0 mg/kg)给予小鼠时,没有可观察到的针对Mch攻击的保护作用[1]。
|
| 激酶实验 |
使用针对M1，M2和M3 mAChR的闪烁亲近测定法和针对M4和M5 mAChR的过滤测定法，使用溴化嘧啶（GSK573719A）和[3H] -N-甲基东莨菪碱（0.5nM）进行配体结合测定。对于闪烁亲近测定分析，将膜与50mM HEPES缓冲液（pH7.4）中的小麦胚凝集素珠在4℃下孵育30分钟，然后将放射性配体在96孔OptiPlate中在室温下孵育2小时。载体（1％DMSO）或GSK573719（0.01-300nM）的存在。在孵育结束时，将板离心（在2000g下5分钟），并计算放射性。对于过滤测定，将膜（M4和M5）类似地在含有放射性配体的HEPES缓冲液中在载体（1％DMSO）或溴化苄（0.03-300nM）存在下在室温下温育2小时。阿托品用作参比剂。通过GF / C过滤器（玻璃微纤维粘合剂不含1.2μ）快速过滤终止反应。用冰冷的50mM HEPES洗涤膜并转移至闪烁瓶中。放射性在闪烁计数器中计数。通过快速过滤终止反应。数据来自三个独立的实验。通过从总结合中减去非特异性结合（使用0.3μM阿托品）来确定特异性结合。计算溴化乌托吡啶的抑制常数（Ki）。含有M3 mAChR的膜也在室温下与在50mM HEPES中存在或不存在溴化苄（0.2-0.5nM）的情况下浓度增加的[3H] -N-甲基东莨菪碱（0.08-9.24nM）一起温育2小时， pH7.4。使用10μM阿托品测定非特异性结合。将饱和度数据转换为分析图用于分析[1]。
|
| 动物实验 |
小鼠[1]年龄匹配的雄性BALB / c小鼠（23-25克）在乙酰甲胆碱激发前，间隔（0.25-48小时）用载体（0.9％盐水）或溴化嘧啶（Umeclidinium bromide）鼻内预处理（每只小鼠50μL），并放入单独的体积描记器室。新鲜空气由偏流泵供应到腔室。在收集基线呼吸[增强暂停（Penh）]值后，小鼠通过气溶胶递送（流速= 1.6mL / min×2分钟）接受乙酰甲胆碱（30mg / mL或EC80）。然后计算平均Penh 5分钟。 Penh = [（呼气时间/弛豫时间）-1]×（呼气峰值流量/峰值吸气流量），并且弛豫时间是70％潮气量到期所需的时间量。在某些情况下，如图例中所述，动物连续多天进行治疗。数据表示为Penh的平均值±SEM百分比抑制或（每种药物处理的动物的载体处理组-Penh的平均Penh值）除以（载体处理组的平均Penh值）×100％。使用市售软件分析数据。
|
| 参考文献 |
[1]. Salmon M, et al. Pharmacological characterization of GSK573719 (umeclidinium): a novel, long-acting, inhaled antagonist of the muscarinic cholinergic receptors for treatment of pulmonary diseases. J Pharmacol Exp Ther. 2013 May;345(2):260-70. [2]. Cazzola M, et al. Pharmacology and therapeutics of bronchodilators. Pharmacol Rev. 2012 Jul;64(3):450-504. [3]. Calzetta L, et al. Pharmacological characterization of the interaction between umeclidinium and vilanterol in human bronchi. Eur J Pharmacol. 2017 Jul 14. pii: S0014-2999(17)30470-3.
|
