| 描述 |
GSK461364 是选择性,可逆,ATP竞争性的 PLK1 抑制剂,Ki 值为 2.2 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
PLK1:2.2 nM (Ki)
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| 体外研究 |
GSK461364是一种有效的,选择性的,可逆的ATP竞争性Plk1抑制剂(Ki,2.2 nM),Plk1的选择性比Plk2和Plk3高至少390倍,选择性比其他48种激酶高1000倍[ 1]。抑制plk1的GSK461364(GSK461364A,250nM)导致A549和PL45细胞中延长的有丝分裂延迟,异常的有丝分裂退出和p53活化。与具有非沉默对照siRNA的细胞相比,p53的敲低显着增强了细胞对GSK461364A(30或300nM)的预防A549和NCI-H460细胞生长的敏感性[2]。 GSK461364可抑制大多数增殖癌细胞系的细胞生长,并抑制89％的癌细胞系(74个细胞系中的66个)增殖,GI50(抑制50％细胞生长所需的浓度)≤100nM。 GSK461364(GSK461364A,> 20nM)阻断G2-M期细胞,A549肺癌细胞G1期细胞减少。 GSK461364(10-250 nM)阻断细胞周期的G2和M期细胞,并在癌细胞中引起M期caspase-3/caspase-7活化[3]。 GSK461364(0.5-2μM)降低PLK1和pCDC25C的水平,并且引起pHisH3的剂量和时间依赖性增加,这是OS细胞系中有丝分裂停滞的指标[4]。
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| 体内研究 |
GSK461364(50mg/kg)在多个异种移植肿瘤模型中表现出不同程度的肿瘤生长延迟(TGD),每2天腹腔注射一次剂量,重复12次(q2d×12)[1]。
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| 激酶实验 |
使用Z'-Lyte测定试剂盒（Ser / Thr肽16）在10μL的最终测定体积中进行激酶反应。简而言之，反应包含50mM HEPES（pH 7.5），10mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM DTT，0.01％Brij 35,0.01mg / mL酪蛋白，200μMATP，200μMPoloBox肽（NH2-MAGPMQS [pT] ] PLNGAKK-OH）和6nM重组Plk1（H6-tev-PLK 1-603）。在存在或不存在0至1,000nM GSK461364的情况下将Plk1预孵育60分钟。然后通过加入2μM肽引发反应。在23℃下15分钟后，淬灭反应并根据Z'-Lyte方案处理并在读板器上读数。将原始荧光值转换为使用底物和产物标准物形成的产物浓度。使用GraFit软件使用双参数拟合（Hill系数和IC50）确定IC 50值。因为观察到GSK461364的抑制效力随ATP浓度的变化以与ATP竞争性抑制模式一致的方式变化，所以通过应用Cheng-Prusoff关系确定GSK461364的Ki * app的上限。对于竞争性抑制剂（ATP Km * app =16μM）至GSK461364预孵育60分钟获得的IC50值。
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| 细胞实验 |
细胞系在推荐的培养基中在37℃，5％CO 2下在潮湿的培养箱中生长。将细胞以每孔1,000个细胞接种于一式三份的96孔微量滴定板中的培养基中。第二天加入溶于DMSO或阴性对照（0.1％DMSO）中的GSK461364（GSK461364A），并用50μLCellTiter-Glo收获一个平板，进行0（T = 0）测量。
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| 动物实验 |
将细胞植入裸鼠中并作为肿瘤异种移植物生长。当肿瘤达到约100 mm3时开始给药。每2天（q2d×6，q2d×12）或标称每4天（q4d×3）腹腔注射GSK461364（GSK461364A）或载体[4％DMA / Cremaphore（50:50），pH 5.6]剂量水平为25,50和100mg / kg /剂。结果报告为n = 7至8只小鼠的中位肿瘤体积。紫杉醇（30mg / kg静脉内; q4d×3）用作阳性对照用于比较。用Vernier卡尺每周测量肿瘤三次，并使用近似于长椭球体积[肿瘤体积mm3 =（长度×宽度2）×0.5]的等式从二维测量计算肿瘤体积。最大耐受剂量定义为产生> 20％死亡率或> 20％体重减轻（约4g）的最高剂量。抗肿瘤活性定义为肿瘤生长延迟（TGD），部分消退（PR）或完全消退（CR）。 TGD表示治疗肿瘤和对照肿瘤之间达到预定肿瘤体积1,000mm 3的时间差。 PR定义为个体肿瘤体积减少至初始起始体积的一半至少1周（三次连续测量）。 CR定义为个体肿瘤体积减少至<13 mm3至少1周。
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| 参考文献 |
[1]. Olmos D, et al. Phase I study of GSK461364, a specific and competitive Polo-like kinase 1 inhibitor, in patients with advanced solid malignancies. Clin Cancer Res. 2011 May 15;17(10):3420-30. [2]. Degenhardt Y, et al. Sensitivity of cancer cells to Plk1 inhibitor GSK461364A is associated with loss of p53 function and chromosome instability. Mol Cancer Ther. 2010 Jul;9(7):2079-89 [3]. Gilmartin AG, et al. Distinct concentration-dependent effects of the polo-like kinase 1-specific inhibitor GSK461364A, including differential effect on apoptosis. Cancer Res. 2009 Sep 1;69(17):6969-77. [4]. Chou YS, et al. Cytotoxic mechanism of PLK1 inhibitor GSK461364 against osteosarcoma: Mitotic arrest, apoptosis, cellular senescence, and synergistic effect with paclitaxel. Int J Oncol. 2016 Mar;48(3):1187-94.
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