替沃扎尼的作用和生物活性

替沃扎尼是一种口服生物可利用的血管内皮生长因子受体（VEGFRs）1,2和3抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍替沃扎尼的生物活性：

1）体外活性
替沃扎尼有效抑制内皮细胞中VEGF诱导的VEGFR2磷酸化（IC50=0.16nM）。它还抑制配体诱导的PDGFRβ和c-Kit的磷酸化（分别为IC50=1.72和1.63nM），阻断VEGF依赖性，但不依赖于VEGF，激活丝裂原活化蛋白激酶和内皮细胞增殖。它抑制VEGF介导的人脐静脉内皮细胞迁移[1]。

2）体内活性
下面是p.o.给予无胸腺大鼠，替沃扎尼降低肿瘤异种移植物内的微血管密度并减弱肿瘤内皮中的VEGFR-2磷酸化水平。它还显示出对多种人类肿瘤异种移植物的抗肿瘤活性，包括肺癌，乳腺癌，结肠癌，卵巢癌，胰腺癌和前列腺癌[1]。

我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
小鼠：癌细胞是皮下细胞。接种到无胸腺大鼠的右侧。一旦建立，通过手术切除1,500mm3的肿瘤，并且较小的肿瘤碎片（20-30mg）是皮下切除的。植入辐照大鼠右侧。在随机化当天（第0天）开始口服施用KRN951（0.2或1mg/kg）或载体。用Vernier卡尺每周测量肿瘤体积两次，并计算[1]。

2）细胞实验
进行基于细胞的测定以确定KRN951抑制受体酪氨酸激酶的配体依赖性磷酸化的能力。简言之，将细胞在含有0.5％胎牛血清（FBS）的适当碱性培养基中饥饿过夜。加入KRN951或0.1％DMSO后，将细胞温育1小时，然后在37℃用同源配体刺激。除VEGFR3（10分钟），c-Met（10分钟）和c-Kit（15分钟）外，诱导受体磷酸化5分钟。除了VEGF-C（大鼠重组蛋白）外，测定中使用的所有配体都是人重组蛋白。细胞裂解后，用适当的抗体免疫沉淀受体，并用磷酸酪氨酸进行免疫印迹。进行印迹的定量和IC50值的计算[1]。

3）激酶实验
无细胞激酶测定用1μMATP一式四份进行，以确定AV-951对多种重组受体和非受体酪氨酸激酶的IC50值，包括VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3，c-Kit，PDGFRβ，Flt-3和FGFR1。

今天介绍了替沃扎尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，替沃扎尼Tivozanib(AV-951;KRN951)是有效，选择性的VEGFR1/2/3抑制剂，IC50值分别为0.21，0.16，and0.24nM。替沃扎尼的靶点活性为EphB2,24nM；PDGFRα,40nM；VEGFR1,30nM；VEGFR2,6.5nM；VEGFR3,15nM。

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参考文献：
[1]. Nakamura K, et al. KRN951, a highly potent inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases, has antitumor activities and affects functional vascular properties. Cancer Res. 2006 Sep 15;66(18):9134-42.