阿西替尼的作用和生物活性
发布时间：2018-11-07 14:45:46 编辑作者：活性达人
图片：阿西替尼结构式
阿西替尼是一种口服生物可利用的酪氨酸激酶抑制剂，抑制促血管生成细胞因子血管内皮生长因子（VEGF）和血小板衍生生长因子受体（PDGF），从而发挥抗血管生成作用。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍阿西替尼的生物活性：
1）体外活性
阿西替尼可使VEGFR自磷酸化作用和VEGF调节的微管形成、内皮细胞活力及下游信号被阻断。它是VEGFR1至3的有效选择性抑制剂。在转染或内源性RTK表达细胞中，阿西替尼有效阻断生长因子刺激的VEGFR-2和VEGFR-3磷酸化，平均IC50值为0.2和分别为0.1至0.3nM。针对VEGFR-1的细胞活性为1.2nM（在2.3％牛血清白蛋白存在下测量），相当于基于阿西替尼的蛋白质结合的~0.1nM的绝对IC50。
阿西替尼对多种细胞系增殖均有抑制，如IGR-N91（IC50：>1000nM）,IGR-NB8（IC50：849nM）,SH-SY5Y（IC50：274nM），无VEGF刺激的HUVEC（IC50：573nM）。作为受体激酶抑制剂，阿西替尼对VEGFR-1（IC50：0.1nM）,VEGFR-2（IC50：0.2nM），VEGFR-3（IC50：0.1-0.3nM），PDGFR-β（IC50：1.6nM）和c-KIT（IC50：1.7nM）均有抑制作用。
在Flk-1转染的NIH-3T3细胞中针对鼠VEGFR-2（Flk-1）的效力是0.18nM，类似于其人同源物的效力。阿西替尼对密切相关的III型和V型RTK显示高出约8至25倍的IC50，包括PDGFR-β（1.6nM），KIT（1.7nM）和PDGFR-α（5nM）;纳摩尔浓度的阿西替尼阻断PDGFBB介导的人脑胶质瘤U87MG细胞（PDGFR-β阳性）迁移但不增殖[2]。
2）体内活性
与对照肿瘤相比，单次口服剂量的阿西替尼（100mg/kg）显着抑制鼠VEGFR-2磷酸化长达7小时。阿西替尼迅速抑制VEGF诱导的小鼠皮肤血管通透性;抑制作用呈剂量依赖性，与小鼠的药物浓度直接相关。药代动力学/药效学分析表明未结合的EC50为0.46nM。在没有外源性VEGF-A刺激的MV522荷瘤小鼠的皮肤中也显示出类似的抑制作用。
阿西替尼抑制小鼠中人异种移植肿瘤的生长。无论初始肿瘤大小，模型类型或植入部位如何，阿西替尼都会产生剂量依赖性生长延迟[2]。活体研究显示，与对照组相比，阿西替尼（30mg/kg，p.o.）组使肿瘤生长推迟11.4天；且用于IGR-N91侧腹移植瘤时，与对照组（密度为49）相比，阿西替尼组（密度为21）使血管密度降低。
阿西替尼对常位移植模型有抑制作用，如HCT-116(结肠直肠癌)、M24met(黑色素瘤)和SN12C(肾细胞癌)。在非小细胞肺癌，甲状腺癌，肾细胞癌，黑色素瘤等多种肿瘤中，阿西替尼显示出单一药效活性。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
小鼠和大鼠[2]-将具有M24met异种移植肿瘤（400-600mm3）的小鼠与单剂量的阿西替尼或对照（0.5％羧甲基纤维素/H2O）一起施用。收集血液和肿瘤组织样品用于药代动力学和VEGFR-2测量。使用Bradford比色测定法测定肿瘤组织中的总蛋白质浓度。给予6日龄Sprague-Dawley大鼠两次腹膜内注射。注射阿西替尼（30mg/kg）。处死动物，收集视网膜并裂解，并进行免疫沉淀/免疫印迹实验。ECL-Plus用于检测，使用AlphaImager8800进行光密度分析。
2）细胞实验
在1％FBS（HUVEC）或0.1％FBS（肿瘤细胞）存在下，使内皮细胞或肿瘤细胞饥饿18小时。加入阿西替尼并将细胞在1mMNa3VO4存在下于37℃温育45分钟。向细胞中加入适当的生长因子，5分钟后，用冷PBS漂洗细胞，并在裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂混合物中裂解。将裂解物与免疫沉淀抗体一起在4℃下孵育过夜蛋白质。将抗体复合物与蛋白A珠缀合，并通过SDS-PAGE分离上清液[2]。
3）激酶实验
细胞受体激酶磷酸化测定：产生过表达全长VEGFR2，PDGFRβ，Kit和NIH-3T3的猪主动脉内皮细胞（PAE）细胞，其过表达鼠VEGFR2（Flk-1）或PDGFRα。96孔板涂有100μL/孔的2.5μg/mL抗VEGFR2抗体，0.75μg/mL抗PDGFRβ抗体，0.25μg/mL抗PDGFRα抗体，0.5μg/mL抗KIT抗体，或1.20μg/mL抗Flk-1抗体制备ELISA捕获板。然后通过ELISA测量RTK的磷酸化。
今天介绍了阿西替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，阿西替尼是一种VEGFR抑制剂，高浓度时也抑制PDGFR，作用于VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3和PDGFRβ，IC50分别为0.1nM，0.2nM，0.1-0.3nM和1.6nM。阿西替尼的靶点活性为PDGFRβ,1.6nM；VEGFR1/FLT1,0.1nM；VEGFR2/Flk1,0.18nM；VEGFR2/KDR,0.2nM；VEGFR3,0.1nM-0.3nM。
您可能想了解阿西替尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/319460-85-0_894735.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Fenton BM, et al. The addition of AG-013736 to rractionated radiation improves tumor response without functionally normalizing the tumor vasculature. Cancer Res. 2007 Oct 15;67(20):9921-8.
[2]. Hu-Lowe DD, et al. Nonclinical antiangiogenesis and antitumor activities of axitinib (AG-013736), an oral, potent, and selective inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases 1, 2, 3. Clin Cancer Res. 2008 Nov 15;14(22):7272-83
[3]. Allen E, et al. Metabolic Symbiosis Enables Adaptive Resistance to Anti-angiogenic Therapy that Is Dependent on mTOR Signaling. Cell Rep. 2016 May 10;15(6):1144-60.
首先我们介绍阿西替尼的生物活性：
1）体外活性
阿西替尼可使VEGFR自磷酸化作用和VEGF调节的微管形成、内皮细胞活力及下游信号被阻断。它是VEGFR1至3的有效选择性抑制剂。在转染或内源性RTK表达细胞中，阿西替尼有效阻断生长因子刺激的VEGFR-2和VEGFR-3磷酸化，平均IC50值为0.2和分别为0.1至0.3nM。针对VEGFR-1的细胞活性为1.2nM（在2.3％牛血清白蛋白存在下测量），相当于基于阿西替尼的蛋白质结合的~0.1nM的绝对IC50。
阿西替尼对多种细胞系增殖均有抑制，如IGR-N91（IC50：>1000nM）,IGR-NB8（IC50：849nM）,SH-SY5Y（IC50：274nM），无VEGF刺激的HUVEC（IC50：573nM）。作为受体激酶抑制剂，阿西替尼对VEGFR-1（IC50：0.1nM）,VEGFR-2（IC50：0.2nM），VEGFR-3（IC50：0.1-0.3nM），PDGFR-β（IC50：1.6nM）和c-KIT（IC50：1.7nM）均有抑制作用。
在Flk-1转染的NIH-3T3细胞中针对鼠VEGFR-2（Flk-1）的效力是0.18nM，类似于其人同源物的效力。阿西替尼对密切相关的III型和V型RTK显示高出约8至25倍的IC50，包括PDGFR-β（1.6nM），KIT（1.7nM）和PDGFR-α（5nM）;纳摩尔浓度的阿西替尼阻断PDGFBB介导的人脑胶质瘤U87MG细胞（PDGFR-β阳性）迁移但不增殖[2]。
2）体内活性
与对照肿瘤相比，单次口服剂量的阿西替尼（100mg/kg）显着抑制鼠VEGFR-2磷酸化长达7小时。阿西替尼迅速抑制VEGF诱导的小鼠皮肤血管通透性;抑制作用呈剂量依赖性，与小鼠的药物浓度直接相关。药代动力学/药效学分析表明未结合的EC50为0.46nM。在没有外源性VEGF-A刺激的MV522荷瘤小鼠的皮肤中也显示出类似的抑制作用。
阿西替尼抑制小鼠中人异种移植肿瘤的生长。无论初始肿瘤大小，模型类型或植入部位如何，阿西替尼都会产生剂量依赖性生长延迟[2]。活体研究显示，与对照组相比，阿西替尼（30mg/kg，p.o.）组使肿瘤生长推迟11.4天；且用于IGR-N91侧腹移植瘤时，与对照组（密度为49）相比，阿西替尼组（密度为21）使血管密度降低。
阿西替尼对常位移植模型有抑制作用，如HCT-116(结肠直肠癌)、M24met(黑色素瘤)和SN12C(肾细胞癌)。在非小细胞肺癌，甲状腺癌，肾细胞癌，黑色素瘤等多种肿瘤中，阿西替尼显示出单一药效活性。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
小鼠和大鼠[2]-将具有M24met异种移植肿瘤（400-600mm3）的小鼠与单剂量的阿西替尼或对照（0.5％羧甲基纤维素/H2O）一起施用。收集血液和肿瘤组织样品用于药代动力学和VEGFR-2测量。使用Bradford比色测定法测定肿瘤组织中的总蛋白质浓度。给予6日龄Sprague-Dawley大鼠两次腹膜内注射。注射阿西替尼（30mg/kg）。处死动物，收集视网膜并裂解，并进行免疫沉淀/免疫印迹实验。ECL-Plus用于检测，使用AlphaImager8800进行光密度分析。
2）细胞实验
在1％FBS（HUVEC）或0.1％FBS（肿瘤细胞）存在下，使内皮细胞或肿瘤细胞饥饿18小时。加入阿西替尼并将细胞在1mMNa3VO4存在下于37℃温育45分钟。向细胞中加入适当的生长因子，5分钟后，用冷PBS漂洗细胞，并在裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂混合物中裂解。将裂解物与免疫沉淀抗体一起在4℃下孵育过夜蛋白质。将抗体复合物与蛋白A珠缀合，并通过SDS-PAGE分离上清液[2]。
3）激酶实验
细胞受体激酶磷酸化测定：产生过表达全长VEGFR2，PDGFRβ，Kit和NIH-3T3的猪主动脉内皮细胞（PAE）细胞，其过表达鼠VEGFR2（Flk-1）或PDGFRα。96孔板涂有100μL/孔的2.5μg/mL抗VEGFR2抗体，0.75μg/mL抗PDGFRβ抗体，0.25μg/mL抗PDGFRα抗体，0.5μg/mL抗KIT抗体，或1.20μg/mL抗Flk-1抗体制备ELISA捕获板。然后通过ELISA测量RTK的磷酸化。
今天介绍了阿西替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，阿西替尼是一种VEGFR抑制剂，高浓度时也抑制PDGFR，作用于VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3和PDGFRβ，IC50分别为0.1nM，0.2nM，0.1-0.3nM和1.6nM。阿西替尼的靶点活性为PDGFRβ,1.6nM；VEGFR1/FLT1,0.1nM；VEGFR2/Flk1,0.18nM；VEGFR2/KDR,0.2nM；VEGFR3,0.1nM-0.3nM。
您可能想了解阿西替尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/319460-85-0_894735.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Fenton BM, et al. The addition of AG-013736 to rractionated radiation improves tumor response without functionally normalizing the tumor vasculature. Cancer Res. 2007 Oct 15;67(20):9921-8.
[2]. Hu-Lowe DD, et al. Nonclinical antiangiogenesis and antitumor activities of axitinib (AG-013736), an oral, potent, and selective inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases 1, 2, 3. Clin Cancer Res. 2008 Nov 15;14(22):7272-83
[3]. Allen E, et al. Metabolic Symbiosis Enables Adaptive Resistance to Anti-angiogenic Therapy that Is Dependent on mTOR Signaling. Cell Rep. 2016 May 10;15(6):1144-60.
相关化合物：阿西替尼
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