索拉非尼的作用和生物活性
发布时间：2018-11-06 11:36:30 编辑作者：活性达人
图片：索拉非尼结构式
索拉非尼是一种靶向生长信号和血管生成的合成化合物。索拉非尼阻断酶RAF激酶，这是控制细胞分裂和增殖的RAF/MEK/ERK信号通路的关键组分;此外，索拉非尼抑制VEGFR-2/PDGFR-β信号级联反应，从而阻断肿瘤血管生成。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍索拉非尼的生物活性：
1）体外活性
索拉非尼（BAY43-9006）也抑制BRAFwt（IC50=22nM），BRAFV599E（IC50=38nM），VEGFR-2（IC50=90nM），VEGFR-3（IC50=20nM），PDGFR-β（IC50）生化测定中，c-KIT（IC50=68nM）和Flt3（IC50=58nM）。在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，索拉非尼完全阻断MAPK途径的激活。细胞与索拉非尼预孵育（0.01至3μM），并且基础MEK1/2和ERK1/2磷酸化的剂量依赖性抑制（分别为IC50,40和100nM）[1]。
2）体内活性
索拉非尼在人肿瘤异种移植模型组中表现出广泛的口服抗肿瘤功效。索拉非尼口服7.5至60毫克/千克。相对于相应的对照组，在任何治疗组中没有致死性并且没有体重减轻的增加。每日口服索拉非尼（30至60mg/kg）可在治疗期间在六个模型中的五个中产生完全的肿瘤停滞[1]。
二乙基亚硝胺（DENA）组的存活率为73.3％，索拉非尼组的存活率为83.3％，而正常对照组的存活率为100％。与正常对照组相比，DENA组显示肝脏指数显着增加（1.51倍增加，p<0.05），而与DENA组相比，索拉非尼治疗显示肝脏指数显着降低（p<0.05）。索拉非尼组的肝脏指数显着降低至低于正常对照组的值[2]。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
小鼠[1]-使用雌性NCr-nu/nu小鼠。携带75至150mg肿瘤的小鼠用索拉非尼（7.5至60mg/kg）口服治疗，每天施用9天。在每个模型中，索拉非尼产生剂量依赖性肿瘤生长抑制，没有毒性迹象，通过相对于对照动物增加的体重减轻或药物相关致死率来测量。与抗肿瘤效力研究平行，另外一组4只带有100至200mg肿瘤的小鼠用载体或索拉非尼（30至60mg/kg）口服治疗，每天给药5天，这是产生完整肿瘤的最短治疗持续时间。治疗组停滞。
大鼠[2]-在该研究中，使用100至120g雄性白化病大鼠。在适应期后，将大鼠称重并随机分成三组：第1组（正常对照组;n=10）每天给予载体8周。第2组（DENA组;n=15）接受i.p.单剂量200mg/kgDENA。第3组（索拉非尼组;n=12）以10mg/kg的剂量口服给予索拉非尼，持续2周，在DENAi.p.后6周。注射。在实验结束时（8周），将大鼠称重，用乙醚麻醉并杀死，解剖它们的肝脏。将新鲜肝脏用冰冷的盐水洗涤两次，在干净的纸巾上干燥，并称重。肝脏指数计算为肝脏重量（g）/最终体重（g）×100。将肝脏分成五部分：一部分保存在10％福尔马林中用于组织病理学检查，另一部分立即在液氮中冷冻并储存在-80℃。
2）细胞实验
将MDA-MB-231人乳腺癌细胞系以每孔2×105个细胞接种在DMEM生长培养基（10％热灭活的FCS）中的12孔组织培养板中过夜。用无血清培养基洗涤细胞一次，并在补充有0.1％不含脂肪酸的BSA的DMEM中孵育，所述BSA含有各种浓度的BAY43-9006（0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μM）在0.1％DMSO中的120分钟测量基础pMEK1/2，pERK1/2或pPKB的变化。
用冷PBS（含有0.1mM钒酸盐的PBS）洗涤细胞，并在含有蛋白酶抑制剂的1％（v/v）TritonX-100溶液中裂解。通过离心澄清裂解物，进行SDS-PAGE，转移至硝酸纤维素膜，在TBS-BSA中封闭，并用抗pMEK1/2（Ser217/Ser221;1：1000），抗MEK1/2，抗探测。-pERK1/2（Thr202/Tyr204;1：1000），抗ERK1/2，抗-pPKB（Ser473;1：1000）或抗PKB一抗。用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗开发印迹，并用AmershamECL试剂在AmershamHyperfilm上开发[1]。
3）激酶实验
为了测试化合物对各种RAF激酶同种型的抑制作用，将索拉非尼加入到Raf-1（80ng），wtBRAF或V599EBRAF（80ng）与MEK-1（1μg）在测定缓冲液[20mMTris]中的混合物中（pH8.2），100mMNaCl，5mMMgCl2和0.15％β-巯基乙醇]，终浓度为1％DMSO。通过添加25μL10μMγ-[33P]ATP（400Ci/mol）引发RAF激酶测定（终体积50μL），并在32℃下孵育25分钟。
通过过滤将磷酸化的MEK-1收获到磷酸纤维素垫上，并使用1％的磷酸洗去未结合的放射性。通过微波加热干燥后，使用β板计数器来量化过滤器结合的放射性[1]。IDBS）使用非线性回归计算多韦替尼对IC50的浓度。在接近ATP的Km的ATP浓度下测定集落刺激因子-1受体（CSF-1R），PDGFRα，胰岛素受体（InsR）和胰岛素样生长因子受体1（IGFR1）激酶活性的抑制。
今天介绍了索拉非尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，索拉非尼Sorafenib(Bay43-9006)是有效的多激酶抑制剂，抑制Raf-1，B-Raf和VEGFR-3的IC50分别为6nM，20nM，22nM。索拉非尼的靶点活性为B-Raf,22nM；B-Raf(V599E),38nM；Raf-1,6nM；VEGFR2/Flk1,15nM；VEGFR3,20nM。
您可能想了解索拉非尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/284461-73-0_894723.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Wilhelm SM, et al. BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAF/MEK/ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis. Cancer Res. 2004 Oct 1;64(19):7099-109.
[2]. El-Ashmawy NE, et al. Sorafenib effect on liver neoplastic changes in rats: more than a kinase inhibitor. Clin Exp Med. 2016 Apr 16.
[3]. Jin W, et al. Long non-coding RNA TUC338 is functionally involved in sorafenib-sensitized hepatocarcinoma cells by targeting RASAL1. Oncol Rep. 2017 Jan;37(1):273-280.
[4]. Li M, et al. Activation of an AKT/FOXM1/STMN1 pathway drives resistance to tyrosine kinase inhibitors in lung cancer. Br J Cancer. 2017 Aug 29.
首先我们介绍索拉非尼的生物活性：
1）体外活性
索拉非尼（BAY43-9006）也抑制BRAFwt（IC50=22nM），BRAFV599E（IC50=38nM），VEGFR-2（IC50=90nM），VEGFR-3（IC50=20nM），PDGFR-β（IC50）生化测定中，c-KIT（IC50=68nM）和Flt3（IC50=58nM）。在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，索拉非尼完全阻断MAPK途径的激活。细胞与索拉非尼预孵育（0.01至3μM），并且基础MEK1/2和ERK1/2磷酸化的剂量依赖性抑制（分别为IC50,40和100nM）[1]。
2）体内活性
索拉非尼在人肿瘤异种移植模型组中表现出广泛的口服抗肿瘤功效。索拉非尼口服7.5至60毫克/千克。相对于相应的对照组，在任何治疗组中没有致死性并且没有体重减轻的增加。每日口服索拉非尼（30至60mg/kg）可在治疗期间在六个模型中的五个中产生完全的肿瘤停滞[1]。
二乙基亚硝胺（DENA）组的存活率为73.3％，索拉非尼组的存活率为83.3％，而正常对照组的存活率为100％。与正常对照组相比，DENA组显示肝脏指数显着增加（1.51倍增加，p<0.05），而与DENA组相比，索拉非尼治疗显示肝脏指数显着降低（p<0.05）。索拉非尼组的肝脏指数显着降低至低于正常对照组的值[2]。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
小鼠[1]-使用雌性NCr-nu/nu小鼠。携带75至150mg肿瘤的小鼠用索拉非尼（7.5至60mg/kg）口服治疗，每天施用9天。在每个模型中，索拉非尼产生剂量依赖性肿瘤生长抑制，没有毒性迹象，通过相对于对照动物增加的体重减轻或药物相关致死率来测量。与抗肿瘤效力研究平行，另外一组4只带有100至200mg肿瘤的小鼠用载体或索拉非尼（30至60mg/kg）口服治疗，每天给药5天，这是产生完整肿瘤的最短治疗持续时间。治疗组停滞。
大鼠[2]-在该研究中，使用100至120g雄性白化病大鼠。在适应期后，将大鼠称重并随机分成三组：第1组（正常对照组;n=10）每天给予载体8周。第2组（DENA组;n=15）接受i.p.单剂量200mg/kgDENA。第3组（索拉非尼组;n=12）以10mg/kg的剂量口服给予索拉非尼，持续2周，在DENAi.p.后6周。注射。在实验结束时（8周），将大鼠称重，用乙醚麻醉并杀死，解剖它们的肝脏。将新鲜肝脏用冰冷的盐水洗涤两次，在干净的纸巾上干燥，并称重。肝脏指数计算为肝脏重量（g）/最终体重（g）×100。将肝脏分成五部分：一部分保存在10％福尔马林中用于组织病理学检查，另一部分立即在液氮中冷冻并储存在-80℃。
2）细胞实验
将MDA-MB-231人乳腺癌细胞系以每孔2×105个细胞接种在DMEM生长培养基（10％热灭活的FCS）中的12孔组织培养板中过夜。用无血清培养基洗涤细胞一次，并在补充有0.1％不含脂肪酸的BSA的DMEM中孵育，所述BSA含有各种浓度的BAY43-9006（0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μM）在0.1％DMSO中的120分钟测量基础pMEK1/2，pERK1/2或pPKB的变化。
用冷PBS（含有0.1mM钒酸盐的PBS）洗涤细胞，并在含有蛋白酶抑制剂的1％（v/v）TritonX-100溶液中裂解。通过离心澄清裂解物，进行SDS-PAGE，转移至硝酸纤维素膜，在TBS-BSA中封闭，并用抗pMEK1/2（Ser217/Ser221;1：1000），抗MEK1/2，抗探测。-pERK1/2（Thr202/Tyr204;1：1000），抗ERK1/2，抗-pPKB（Ser473;1：1000）或抗PKB一抗。用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗开发印迹，并用AmershamECL试剂在AmershamHyperfilm上开发[1]。
3）激酶实验
为了测试化合物对各种RAF激酶同种型的抑制作用，将索拉非尼加入到Raf-1（80ng），wtBRAF或V599EBRAF（80ng）与MEK-1（1μg）在测定缓冲液[20mMTris]中的混合物中（pH8.2），100mMNaCl，5mMMgCl2和0.15％β-巯基乙醇]，终浓度为1％DMSO。通过添加25μL10μMγ-[33P]ATP（400Ci/mol）引发RAF激酶测定（终体积50μL），并在32℃下孵育25分钟。
通过过滤将磷酸化的MEK-1收获到磷酸纤维素垫上，并使用1％的磷酸洗去未结合的放射性。通过微波加热干燥后，使用β板计数器来量化过滤器结合的放射性[1]。IDBS）使用非线性回归计算多韦替尼对IC50的浓度。在接近ATP的Km的ATP浓度下测定集落刺激因子-1受体（CSF-1R），PDGFRα，胰岛素受体（InsR）和胰岛素样生长因子受体1（IGFR1）激酶活性的抑制。
今天介绍了索拉非尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，索拉非尼Sorafenib(Bay43-9006)是有效的多激酶抑制剂，抑制Raf-1，B-Raf和VEGFR-3的IC50分别为6nM，20nM，22nM。索拉非尼的靶点活性为B-Raf,22nM；B-Raf(V599E),38nM；Raf-1,6nM；VEGFR2/Flk1,15nM；VEGFR3,20nM。
您可能想了解索拉非尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/284461-73-0_894723.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Wilhelm SM, et al. BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAF/MEK/ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis. Cancer Res. 2004 Oct 1;64(19):7099-109.
[2]. El-Ashmawy NE, et al. Sorafenib effect on liver neoplastic changes in rats: more than a kinase inhibitor. Clin Exp Med. 2016 Apr 16.
[3]. Jin W, et al. Long non-coding RNA TUC338 is functionally involved in sorafenib-sensitized hepatocarcinoma cells by targeting RASAL1. Oncol Rep. 2017 Jan;37(1):273-280.
[4]. Li M, et al. Activation of an AKT/FOXM1/STMN1 pathway drives resistance to tyrosine kinase inhibitors in lung cancer. Br J Cancer. 2017 Aug 29.
相关化合物：索拉非尼
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