瑞格非尼的作用和生物活性
发布时间：2018-11-07 15:08:46 编辑作者：活性达人
图片：瑞格非尼结构式
瑞格非尼是一种激酶抑制剂，它的作用机制是蛋白激酶抑制剂和细胞色素P4502C9抑制剂。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍瑞格非尼的生物活性：
1）体外活性
瑞格非尼有效抑制NIH-3T3/VEGFR2细胞中的VEGFR2自身磷酸化，IC50为3nM。在HAoSMCs中，瑞格非尼在用PDGF-BB刺激后抑制PDGFR-β自身磷酸化，IC50为90nM。瑞格非尼抑制VEGF165刺激的HUVECs的增殖，IC50为3nM[1]。瑞格非尼引起Hep3B细胞生长的浓度依赖性降低，IC50为5μM。瑞格非尼随后增加了磷酸化c-Jun（一种JNK靶标）的水平，但未增加Hep3B细胞中的总c-Jun[3]。
瑞格非尼非常有效地抑制突变受体KITK642E和RETC634W，IC50分别是大约20nM和10nM。瑞格非尼抑制经过VEGF165刺激后的人脐静脉内皮细胞的增殖，IC50为大约3nM。瑞格非尼抑制FGF2刺激的HUVECs和PDGF-BB刺激的HAoSMCs的增殖，IC50分别是127nM和146nM。
瑞格非尼通过抑制酪氨酸激酶受体(VEGFR，KIT，RET，FGFR和PDGFR)和丝氨酸/苏氨酸激酶受体(RAF和p38MAPK)来靶向作用于肿瘤细胞增殖和肿瘤脉管系统。瑞格非尼以浓度依赖和时间依赖方式抑制人Hep3B，PLC/PRF/5和HepG2细胞的生长。瑞格非尼强烈抑制NIH-3T3/VEGFR2细胞中的VEGFR2自磷酸化，IC50为3nM。瑞格非尼在HAoSMCs中，抑制PDGFR-β经过PDGF-BB刺激后的自磷酸化，IC50为90nM。瑞格非尼在MCF-7乳腺癌细胞中，也会抑制FGF10刺激后纤维母细胞生长因子受体的信号传导。
2）体内活性
瑞格非尼在剂量范围10-100mg/kg下有效抑制Colo-205异种移植物的生长，在第14天以10mg/kg剂量达到75％的TGI。在MDA-MB-231模型中，瑞格列尼在低至3mg/kg的剂量下非常有效，导致显着的TGI为81％，在10和30mg/kg的剂量下增加至93％，其中肿瘤达到了停滞[1]。
瑞格非尼不仅可以抑制在脂肪垫中原位生长的同基因原发性4T1乳腺肿瘤的生长，还可以抑制肺部肿瘤转移的形成。瑞格非尼在多种临床前人类异种移植的小鼠模型中，显示有效的肿瘤生长抑制性，这种抑制具有剂量依赖特性，表现为在乳腺MDA-MB-231和肾脏786-O肿瘤模型中肿瘤减小。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
按照联邦指南保存的雌性无胸腺NCrnu/nu小鼠皮下接种5×106个Colo-205或MDA-MB-231细胞或植入1mm3786-O肿瘤碎片。当肿瘤达到100mm3时，瑞格非尼或载体对照在786-O模型中口服qd×21，在Colo-205和MDA-MB-231模型中分别以剂量100，qd×9，30,10和3毫克/千克。紫杉醇每2天×10以乙醇/CremophorEL/盐水（12.5％/12.5％/75％）静脉内施用10mg/kg。每周估计肿瘤大小（体积）（l×w2）/2，并且从终末肿瘤重量（1-T/C×100）获得肿瘤生长抑制百分比（TGI）。从治疗的第一天开始每隔一天对小鼠称重。每天监测小鼠的一般健康状况。
2）细胞实验
对于增殖测定，GIST882和TT细胞在含有L-谷氨酰胺的RPMI培养基中生长，MDA-MB-231，HepG2和A375细胞在DMEM中总是含有10％hiFBS。将细胞用胰蛋白酶消化，以5×104个细胞/孔铺板于含有10％FBS的完全培养基中的96孔板中，并在37℃下生长过夜。第二天，将在完全生长培养基中连续稀释至10μM至5nM终浓度的载体或瑞格非尼加入0.2％DMSO，并继续培养96小时。使用CellTitre-GloTM定量细胞增殖。
3）激酶实验
初始体外激酶抑制分析在MilliporeCorporation以Millipore标准条件下固定的1μM化合物浓度[10μM腺苷-5'-三磷酸（ATP）浓度]进行。从选定的响应激酶，例如VEGFR1和RET确定50％的抑制浓度（IC50）值。使用谷胱甘肽-S-转移酶的重组融合蛋白，TIE2的细胞内结构域和肽生物素-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG作为底物，用均相时间分辨荧光（HTRF）测定法测量TIE2激酶抑制。
今天介绍了瑞格非尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，瑞戈非尼(BAY73-4506)是一种多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂，抑制VEGFR1/2/3，PDGFRβ，Kit，RET和Raf-1的IC50分别为13/4.2/46，22，7，1.5和2.5nM。瑞格非尼的靶点活性为Kit,7nM；Raf-1,2.5nM；RET,1.5nM；VEGFR1,13nM；VEGFR2,4.2nM。
您可能想了解瑞格非尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/755037-03-7_754475.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Wilhelm SM, et al. Regorafenib (BAY 73-4506): a new oral multikinase inhibitor of angiogenic, stromal and oncogenic receptor tyrosine kinases with potent preclinical antitumor activity. Int J Cancer, 2011, 129(1), 245-255.
[2]. Heng DY, et al. Targeted therapy for metastatic renal cell carcinoma: current treatment and future directions. Ther Adv Med Oncol, 2010, 2(1), 39-49.
[3]. Carr BI, et al. Fluoro-Sorafenib (Regorafenib) effects on hepatoma cells: growth inhibition, quiescence, and recovery. J Cell Physiol, 2013, 228(2), 292-297.
[4]. Wagner J, et al. Anti-tumor effects of ONC201 in combination with VEGF-inhibitors significantly impacts colorectal cancer growth and survival in vivo through complementary non-overlapping mechanisms. J Exp Clin Cancer Res. 2018 Jan 22;37(1):11.
[5]. Matsuoka K, et al. Effective Sequential Combined Chemotherapy with Trifluridine/Tipiracil and Regorafenib in Human Colorectal Cancer Cells. Int J Mol Sci. 2018 Sep 25;19(10). pii: E2915.
首先我们介绍瑞格非尼的生物活性：
1）体外活性
瑞格非尼有效抑制NIH-3T3/VEGFR2细胞中的VEGFR2自身磷酸化，IC50为3nM。在HAoSMCs中，瑞格非尼在用PDGF-BB刺激后抑制PDGFR-β自身磷酸化，IC50为90nM。瑞格非尼抑制VEGF165刺激的HUVECs的增殖，IC50为3nM[1]。瑞格非尼引起Hep3B细胞生长的浓度依赖性降低，IC50为5μM。瑞格非尼随后增加了磷酸化c-Jun（一种JNK靶标）的水平，但未增加Hep3B细胞中的总c-Jun[3]。
瑞格非尼非常有效地抑制突变受体KITK642E和RETC634W，IC50分别是大约20nM和10nM。瑞格非尼抑制经过VEGF165刺激后的人脐静脉内皮细胞的增殖，IC50为大约3nM。瑞格非尼抑制FGF2刺激的HUVECs和PDGF-BB刺激的HAoSMCs的增殖，IC50分别是127nM和146nM。
瑞格非尼通过抑制酪氨酸激酶受体(VEGFR，KIT，RET，FGFR和PDGFR)和丝氨酸/苏氨酸激酶受体(RAF和p38MAPK)来靶向作用于肿瘤细胞增殖和肿瘤脉管系统。瑞格非尼以浓度依赖和时间依赖方式抑制人Hep3B，PLC/PRF/5和HepG2细胞的生长。瑞格非尼强烈抑制NIH-3T3/VEGFR2细胞中的VEGFR2自磷酸化，IC50为3nM。瑞格非尼在HAoSMCs中，抑制PDGFR-β经过PDGF-BB刺激后的自磷酸化，IC50为90nM。瑞格非尼在MCF-7乳腺癌细胞中，也会抑制FGF10刺激后纤维母细胞生长因子受体的信号传导。
2）体内活性
瑞格非尼在剂量范围10-100mg/kg下有效抑制Colo-205异种移植物的生长，在第14天以10mg/kg剂量达到75％的TGI。在MDA-MB-231模型中，瑞格列尼在低至3mg/kg的剂量下非常有效，导致显着的TGI为81％，在10和30mg/kg的剂量下增加至93％，其中肿瘤达到了停滞[1]。
瑞格非尼不仅可以抑制在脂肪垫中原位生长的同基因原发性4T1乳腺肿瘤的生长，还可以抑制肺部肿瘤转移的形成。瑞格非尼在多种临床前人类异种移植的小鼠模型中，显示有效的肿瘤生长抑制性，这种抑制具有剂量依赖特性，表现为在乳腺MDA-MB-231和肾脏786-O肿瘤模型中肿瘤减小。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
按照联邦指南保存的雌性无胸腺NCrnu/nu小鼠皮下接种5×106个Colo-205或MDA-MB-231细胞或植入1mm3786-O肿瘤碎片。当肿瘤达到100mm3时，瑞格非尼或载体对照在786-O模型中口服qd×21，在Colo-205和MDA-MB-231模型中分别以剂量100，qd×9，30,10和3毫克/千克。紫杉醇每2天×10以乙醇/CremophorEL/盐水（12.5％/12.5％/75％）静脉内施用10mg/kg。每周估计肿瘤大小（体积）（l×w2）/2，并且从终末肿瘤重量（1-T/C×100）获得肿瘤生长抑制百分比（TGI）。从治疗的第一天开始每隔一天对小鼠称重。每天监测小鼠的一般健康状况。
2）细胞实验
对于增殖测定，GIST882和TT细胞在含有L-谷氨酰胺的RPMI培养基中生长，MDA-MB-231，HepG2和A375细胞在DMEM中总是含有10％hiFBS。将细胞用胰蛋白酶消化，以5×104个细胞/孔铺板于含有10％FBS的完全培养基中的96孔板中，并在37℃下生长过夜。第二天，将在完全生长培养基中连续稀释至10μM至5nM终浓度的载体或瑞格非尼加入0.2％DMSO，并继续培养96小时。使用CellTitre-GloTM定量细胞增殖。
3）激酶实验
初始体外激酶抑制分析在MilliporeCorporation以Millipore标准条件下固定的1μM化合物浓度[10μM腺苷-5'-三磷酸（ATP）浓度]进行。从选定的响应激酶，例如VEGFR1和RET确定50％的抑制浓度（IC50）值。使用谷胱甘肽-S-转移酶的重组融合蛋白，TIE2的细胞内结构域和肽生物素-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG作为底物，用均相时间分辨荧光（HTRF）测定法测量TIE2激酶抑制。
今天介绍了瑞格非尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，瑞戈非尼(BAY73-4506)是一种多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂，抑制VEGFR1/2/3，PDGFRβ，Kit，RET和Raf-1的IC50分别为13/4.2/46，22，7，1.5和2.5nM。瑞格非尼的靶点活性为Kit,7nM；Raf-1,2.5nM；RET,1.5nM；VEGFR1,13nM；VEGFR2,4.2nM。
您可能想了解瑞格非尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/755037-03-7_754475.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Wilhelm SM, et al. Regorafenib (BAY 73-4506): a new oral multikinase inhibitor of angiogenic, stromal and oncogenic receptor tyrosine kinases with potent preclinical antitumor activity. Int J Cancer, 2011, 129(1), 245-255.
[2]. Heng DY, et al. Targeted therapy for metastatic renal cell carcinoma: current treatment and future directions. Ther Adv Med Oncol, 2010, 2(1), 39-49.
[3]. Carr BI, et al. Fluoro-Sorafenib (Regorafenib) effects on hepatoma cells: growth inhibition, quiescence, and recovery. J Cell Physiol, 2013, 228(2), 292-297.
[4]. Wagner J, et al. Anti-tumor effects of ONC201 in combination with VEGF-inhibitors significantly impacts colorectal cancer growth and survival in vivo through complementary non-overlapping mechanisms. J Exp Clin Cancer Res. 2018 Jan 22;37(1):11.
[5]. Matsuoka K, et al. Effective Sequential Combined Chemotherapy with Trifluridine/Tipiracil and Regorafenib in Human Colorectal Cancer Cells. Int J Mol Sci. 2018 Sep 25;19(10). pii: E2915.
相关化合物：瑞格非尼
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