皮斐松的作用 - 生物活性 - 靶点活性
发布时间：2018-11-23 14:11:02 编辑作者：活性达人
图片：2-(2-亚氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻唑-3-基)-1-P-苯甲基乙酮氢溴酸盐结构式
皮斐松，英文名Pifithrin-α，CAS号是63208-82-2。它是一种p53抑制剂，可抑制p53反应基因的p53依赖性反式激活。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍皮斐松的生物活性：
1）体外活性
皮斐松（PFT-α）是一种水溶性化合物，可抑制p53蛋白的转录。皮斐松可以抑制葡萄糖氧化酶（GOX）诱导的全细胞裂解物中p53蛋白的增加，但环孢菌素A（CsA）不能显示出这种抑制作用。值得注意的是，皮斐松能够阻断GOX诱导的Bcl-2蛋白减少。 同样，皮斐松而不是CsA能够阻止全细胞裂解物中Bax的增加[1]。它通过未确定的机制抑制p53依赖性细胞凋亡。
皮斐松也可作为芳烃受体（AhR）激动剂，由其结合AhR，诱导其DNA结合复合物形成，激活报告基因活性和上调经典AhR靶基因CYP1A1的能力决定[2]。
2）体内活性
小鼠腹腔注射3.6 μg/kg Pifithrin-α，抑制Dex诱导的胸腺退化。Pifithrin-α（2 mg/kg）与对照组相比，在大脑中动脉暂时闭塞的大鼠中导致运动障碍程度显著降低。当用药物p53抑制剂皮斐松进行实验时，膜联蛋白V阳性Foxe3-/-SMC的百分比降低至WT水平。 Pifithrin-α（2.2 mg / kg，i.p。）显着降低了经历横向主动脉缩窄（TAC）的Foxe3-/-小鼠的主动脉破裂和壁内血肿的发生率（50％至17％，P <0.05）。在Pifthirin-α处理后，升主动脉的平均直径和主动脉培养基中TUNEL阳性细胞的百分比也在存活的Foxe3-/-动物中归一化为WT水平（P <0.05）[3]。
在小鼠大脑中动脉闭塞治疗前30分钟，Pifithrin-α（2 mg/kg i.p.）减少缺血性脑损伤并保护海马神经元免受兴奋毒性损伤。C57BL和Balb/c小鼠腹腔注射2.2 mg/kg Pifithrin-α，使小鼠完全免受60％致死率的γ射线照射造成的损伤。通过Tunel和caspase 3染色，观察到 Pifithrin-α明显降低大鼠的细胞凋亡。当在中风发作后一小时内施用药物时，Pifithrinα处理的动物具有较少的运动障碍和较小的梗塞。与空白对照组相比，Pifithrin-α处理7天后，明显降低大鼠的运动障碍评分。
我们已经了解了皮斐松的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
人肝癌细胞系HepG2（p53 ++）在含有10％胎牛血清（FBS）的RMPI 1640培养基和1％青霉素/链霉素中于37℃在含有5％CO2的气氛中培养。细胞暴露于GOX（0-5 0U）0-8小时，有或没有Pifithrin-α（20μM/ L），Pifithrin-μ（5μM/ L），CsA（10μM/ L），Sanglifehrin A（ 分别为20μM/ L）和NAC（5mM / L）1小时。 处理后，收集细胞并进行处理以进行进一步的实验[1]。
2）动物实验
小鼠[3]-使用Foxe3-null小鼠。为了研究p53在Foxe3相关细胞凋亡中的作用，Pifithrin-α通过腹膜内注射给药。注射剂量为2.2mg / kg，然后在TAC前1小时溶于PBS，然后每48小时一次。在手术后2周对动物实施安乐死，并且收获递增的主动脉组织用于RNA，总蛋白，组织形态学分析或TUNEL测定。
3）激酶实验
进行配体结合竞争测定。来自Hepa-1细胞的细胞溶质细胞提取物通过细胞沉淀在HEDG缓冲液[25mM Hepes，1mM EDTA，1mM二硫苏糖醇和10％（v / v）甘油，pH 7.5]中重新悬浮而产生，其含有0.4mM亮抑酶肽，4mg / mL抑肽酶和0.3mM苯甲基磺酰氟，均质化，并以100,000g离心45分钟。
将等份的上清液（120μg）在室温下与指定浓度的Pifithrin-α在HEDG缓冲液中存在3nM [3H] TCDD的条件下孵育2小时。在冰上用羟基磷灰石孵育30分钟后，加入含有0.5％吐温80的HEDG缓冲液。将样品离心，洗涤两次，重悬于0.2mL闪烁液中，并进行闪烁计数。使用150倍摩尔过量的TCDF测定非特异性结合，并从总结合中减去以获得特异性结合。报道了相对于单独[3H] TCDD的特异性结合[2]。
今天介绍了皮斐松的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，皮斐松Pifithrin-α是一种p53抑制剂，可抑制p53反应基因的p53依赖性反式激活。它的靶点活性是p53。
您可能想了解皮斐松的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/63208-82-2_1195044.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Yu W, et al. Cyclosporine A Suppressed Glucose Oxidase Induced P53 Mitochondrial Translocation and Hepatic Cell Apoptosis through Blocking Mitochondrial Permeability Transition. Int J Biol Sci. 2016 Jan 1;12(2):198-209.
[2]. Hoagland MS, et al. The p53 Inhibitor Pifithrin-α Is a Potent Agonist of the Aryl Hydrocarbon Receptor. J Pharmacol Exp Ther. 2005 Aug;314(2):603-10.
[3]. Kuang SQ, et al. FOXE3 mutations predispose to thoracic aortic aneurysms and dissections. J Clin Invest. 2016 Mar 1;126(3):948-61.
首先我们介绍皮斐松的生物活性：
1）体外活性
皮斐松（PFT-α）是一种水溶性化合物，可抑制p53蛋白的转录。皮斐松可以抑制葡萄糖氧化酶（GOX）诱导的全细胞裂解物中p53蛋白的增加，但环孢菌素A（CsA）不能显示出这种抑制作用。值得注意的是，皮斐松能够阻断GOX诱导的Bcl-2蛋白减少。 同样，皮斐松而不是CsA能够阻止全细胞裂解物中Bax的增加[1]。它通过未确定的机制抑制p53依赖性细胞凋亡。
皮斐松也可作为芳烃受体（AhR）激动剂，由其结合AhR，诱导其DNA结合复合物形成，激活报告基因活性和上调经典AhR靶基因CYP1A1的能力决定[2]。
2）体内活性
小鼠腹腔注射3.6 μg/kg Pifithrin-α，抑制Dex诱导的胸腺退化。Pifithrin-α（2 mg/kg）与对照组相比，在大脑中动脉暂时闭塞的大鼠中导致运动障碍程度显著降低。当用药物p53抑制剂皮斐松进行实验时，膜联蛋白V阳性Foxe3-/-SMC的百分比降低至WT水平。 Pifithrin-α（2.2 mg / kg，i.p。）显着降低了经历横向主动脉缩窄（TAC）的Foxe3-/-小鼠的主动脉破裂和壁内血肿的发生率（50％至17％，P <0.05）。在Pifthirin-α处理后，升主动脉的平均直径和主动脉培养基中TUNEL阳性细胞的百分比也在存活的Foxe3-/-动物中归一化为WT水平（P <0.05）[3]。
在小鼠大脑中动脉闭塞治疗前30分钟，Pifithrin-α（2 mg/kg i.p.）减少缺血性脑损伤并保护海马神经元免受兴奋毒性损伤。C57BL和Balb/c小鼠腹腔注射2.2 mg/kg Pifithrin-α，使小鼠完全免受60％致死率的γ射线照射造成的损伤。通过Tunel和caspase 3染色，观察到 Pifithrin-α明显降低大鼠的细胞凋亡。当在中风发作后一小时内施用药物时，Pifithrinα处理的动物具有较少的运动障碍和较小的梗塞。与空白对照组相比，Pifithrin-α处理7天后，明显降低大鼠的运动障碍评分。
我们已经了解了皮斐松的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
人肝癌细胞系HepG2（p53 ++）在含有10％胎牛血清（FBS）的RMPI 1640培养基和1％青霉素/链霉素中于37℃在含有5％CO2的气氛中培养。细胞暴露于GOX（0-5 0U）0-8小时，有或没有Pifithrin-α（20μM/ L），Pifithrin-μ（5μM/ L），CsA（10μM/ L），Sanglifehrin A（ 分别为20μM/ L）和NAC（5mM / L）1小时。 处理后，收集细胞并进行处理以进行进一步的实验[1]。
2）动物实验
小鼠[3]-使用Foxe3-null小鼠。为了研究p53在Foxe3相关细胞凋亡中的作用，Pifithrin-α通过腹膜内注射给药。注射剂量为2.2mg / kg，然后在TAC前1小时溶于PBS，然后每48小时一次。在手术后2周对动物实施安乐死，并且收获递增的主动脉组织用于RNA，总蛋白，组织形态学分析或TUNEL测定。
3）激酶实验
进行配体结合竞争测定。来自Hepa-1细胞的细胞溶质细胞提取物通过细胞沉淀在HEDG缓冲液[25mM Hepes，1mM EDTA，1mM二硫苏糖醇和10％（v / v）甘油，pH 7.5]中重新悬浮而产生，其含有0.4mM亮抑酶肽，4mg / mL抑肽酶和0.3mM苯甲基磺酰氟，均质化，并以100,000g离心45分钟。
将等份的上清液（120μg）在室温下与指定浓度的Pifithrin-α在HEDG缓冲液中存在3nM [3H] TCDD的条件下孵育2小时。在冰上用羟基磷灰石孵育30分钟后，加入含有0.5％吐温80的HEDG缓冲液。将样品离心，洗涤两次，重悬于0.2mL闪烁液中，并进行闪烁计数。使用150倍摩尔过量的TCDF测定非特异性结合，并从总结合中减去以获得特异性结合。报道了相对于单独[3H] TCDD的特异性结合[2]。
今天介绍了皮斐松的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，皮斐松Pifithrin-α是一种p53抑制剂，可抑制p53反应基因的p53依赖性反式激活。它的靶点活性是p53。
您可能想了解皮斐松的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/63208-82-2_1195044.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Yu W, et al. Cyclosporine A Suppressed Glucose Oxidase Induced P53 Mitochondrial Translocation and Hepatic Cell Apoptosis through Blocking Mitochondrial Permeability Transition. Int J Biol Sci. 2016 Jan 1;12(2):198-209.
[2]. Hoagland MS, et al. The p53 Inhibitor Pifithrin-α Is a Potent Agonist of the Aryl Hydrocarbon Receptor. J Pharmacol Exp Ther. 2005 Aug;314(2):603-10.
[3]. Kuang SQ, et al. FOXE3 mutations predispose to thoracic aortic aneurysms and dissections. J Clin Invest. 2016 Mar 1;126(3):948-61.