描述 |
Ampkinone 是一种间接的 AMP 激活蛋白激酶 (AMPK) 激活剂。
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相关类别 |
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靶点 |
AMPK
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体外研究 |
Ampkinone通过在各种细胞系中间接激活AMPK来刺激AMPK的磷酸化。 Ampkinone介导的AMPK活化需要LKB1的活性,并导致肌肉细胞中葡萄糖摄取增加[1]。
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体内研究 |
Ampkinone处理的DIO小鼠显着降低总体重和总脂肪量。组织学检查和脂质参数测量表明,Ampkinone有效改善DIO小鼠模型中的代谢异常[1]。
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激酶实验 |
使用合成的SAMS肽底物和[γ-32P] ATP测量总AMPK活性。简言之,将500μg蛋白质提取物与抗AMPK-α1和α2抗体在4℃温育2小时。加入蛋白A / G琼脂糖和琼脂糖,将混合物在4℃温育3小时。用RIPA缓冲液洗涤样品三次后,在含有20mM HEPES-NaOH(pH7.0),0.4mM二硫苏糖醇和0.01%Brij-35的AMPK反应缓冲液中评估活性,有或没有300μMAMP。每次测定将免疫复合物加入23μL反应缓冲液中,然后加入7μLSMSS底物肽(HMRSAMSGLHLVKRR,100μM终浓度)和10μLATP混合物(1μCi/μL的等分试样:90μL的75mM加入氯化镁,在20mM MOPS,pH7.2,25mMβ-甘油磷酸盐,5mM EGTA,1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇中的500μM未标记的ATP,并将混合物在30℃温育15分钟。将35μL点在P81纸的中心后,用0.75%磷酸洗涤纸三次,用丙酮洗涤一次5分钟。使用闪烁计数器[1]读取样品。
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动物实验 |
使用小鼠[1] C57BL / 6J小鼠并将其单独饲养在维持在25℃,12 / 12h光/暗时间表的房间中。对于饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠,将4周龄雄性C57BL / 6J小鼠随意喂食高脂肪饮食(HFD,60%卡路里的脂肪),持续8周。聚乙二醇(PEG400)或载体中的安体酮以10mg / kg体重每天皮下施用1个月。每3天测量一次体重和食物摄入量。给所有动物进行胰岛素耐量试验(ITT)并在30天时处死。测量肝脏重量和脂肪量,切片,并用油红O和H&E染色。
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参考文献 |
[1]. Oh S, et al. Antidiabetic and antiobesity effects of Ampkinone (6f), a novel small molecule activator of AMP-activated protein kinase. J Med Chem. 2010 Oct 28;53(20):7405-13.
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