描述 |
SecinH3 是 cytohesins 的拮抗剂,对于 hCyh1, hCyh2,mCyh3,hCyh3,drosophila steppke 和 yGea2-S7 的 IC50 值分别为 5.4 μM,2.4 μM,5.4 μM,5.6 μM,5.6 μM 和 65 μM。
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相关类别 |
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靶点 |
IC50: 5.4 μM (hCyh1),2.4 μM (hCyh2),5.4 μM (mCyh3),5.6 μM (hCyh3),5.6 μM (drosophila steppke), 65 μM (yGea2-S7)[1]
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体外研究 |
SecinH3是Sec7特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)抑制剂,优选细胞粘附素家族的小型GEF。 SecinH3几乎完全阻断IGFBP1的胰岛素依赖性转录抑制,IC50为2.2μM。 SecinH3也抑制了胰岛素刺激的ARF6向质膜的易位。发现SecinH3以浓度依赖性方式抑制Akt和FoxO1A的胰岛素依赖性磷酸化。 SecinH3完全阻止了胰岛素诱导的细胞核中FoxO1A的排斥。 SecinH3也抑制了IRS1与胰岛素受体的结合[1]。
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体内研究 |
与不含SecinH3的相同食物喂养的小鼠相比,胰岛素抑制的糖异生基因的表达水平升高,而SecinH3处理的小鼠中胰岛素诱导的糖酵解基因降低。在SecinH3处理的小鼠中胰岛素刺激的Akt磷酸化也被抑制。在SecinH3处理的小鼠中,线粒体β-氧化的两种关键酶,肉毒碱棕榈酰转移酶1a(Cpt1a)和羟酰基辅酶A脱氢酶(Hadha)的基因表达均被胰岛素抑制。发现在SecinH3处理的小鼠中葡萄糖浓度略微升高,血清胰岛素水平显着增加。因此,SecinH3处理的小鼠血清中3-羟基丁酸盐增加[1]。
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细胞实验 |
将105个HepG2细胞接种在12孔板中,并在含有10%FCS的EMEM中培养24小时。然后将细胞在EMEM中血清饥饿24小时,并在SecinH3,阴性对照D5或载体(0.2%终浓度的DMSO)存在下用10nM胰岛素刺激12小时。使用Kit制备总mRNA,并且从1μgRNA产生qPCR的cDNA。进行qPCR并将数据标准化为β2-微球蛋白表达[1]。
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动物实验 |
将C57 / Bl6N小鼠在无病原体的动物设施中保持12小时光照/黑暗循环,并随意喂食标准小鼠饮食。在用标准饮食或含有0.9μmol/ g SecinH3的相同饮食喂养3天后,给小鼠腹膜内注射含有或不含40μg重组人胰岛素的100μL盐水。 10分钟后,将小鼠麻醉并取出肝脏并在裂解缓冲液中裂解。标准化量的蛋白质通过SDS-PAGE分离并转移到硝酸纤维素膜上,或使用针对IRβ或IRS1的琼脂糖缀合的抗体进行免疫沉淀[1]。
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参考文献 |
[1]. Hafner M, et al. Inhibition of cytohesins by SecinH3 leads to hepatic insulin resistance. Nature. 2006 Dec 14;444(7121):941-4.
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