泊马度胺的作用 - 生物活性 - 靶点活性
发布时间：2018-11-26 13:32:23 编辑作者：活性达人
图片：泊马度胺结构式
泊马度胺，英文名Pomalidomide，CAS号是19171-19-8，它是一种免疫调节和抗肿瘤药物，用于治疗多发性骨髓瘤。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍泊马度胺的生物活性：
1）体外活性
泊马度胺也抑制全血TNF-α，IC50为25nM[1]。与媒介物处理的对照相比，淋巴瘤细胞暴露于泊马度胺（CC-4047）导致细胞增殖减少40％。泊马度胺抑制Raji细胞DNA合成的40％（P=0.036）[2]。在CD4+和CD8+细胞中，泊马度胺（CC-4047）是最有效的IL-2升降机，其次是CC-6032和CC-5013。泊马度胺在提高IL-2，IL-5和IL-10方面明显比CC-5013更有效，在提高IFN-γ方面比CC-5013更有效[3]。
2）体内活性
在mAb治疗前连续两天施用泊马度胺（CC-4047）增强了利妥昔单抗的抗肿瘤活性，并使携带淋巴瘤的小鼠的中位存活率加倍。统计学上，在利妥昔单抗与泊马度胺+利妥昔单抗治疗的动物之间观察到显着差异。使用泊马度胺和利妥昔单抗治疗的动物的中位生存时间比使用利妥昔单抗单药治疗的动物更长（中位生存期，74天;95％CI，70-78）（中位生存期，38天;95％CI，26-50;log-试验，P=0.002）。
如流式细胞术分析所示，在携带淋巴瘤的SCID小鼠中[2]，连续两天施用CC-5013或泊马度胺导致循环NK细胞数量的显着增加。向大鼠施用50mg/kgPO的泊马度胺（POM）后，血液中未结合的浓度在4.6±2.4小时达到1100±82ng/mL的Cmax值，伴随的AUC（0-10）值为6800±2000ng•hr/mL。然而，大脑中未结合的POM在4.1±1.5小时时的Cmax值为430±63ng/mL，AUC（0-10）值为2700±740ng•hr/mL，给出未结合的AUC脑与AUC血液比率0.39±0.03。这些值与优秀的血脑屏障穿透一致。在该研究中获得的结果与在对小鼠口服给药后观察全脑POM含量的同时研究中观察到的结果一致[4]。
我们已经了解了泊马度胺的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
将淋巴瘤细胞系置于96孔板（每孔1×105个细胞）中并暴露于升高浓度的CC-5013，泊马度胺（2.5,5,10,20和40μg/mL）或载体对照单一试剂或与利妥昔单抗或曲妥珠单抗（同种型）组合，最终抗体浓度为10μg/mL。用10％RPMI将终浓度调节至200μL。将细胞系在37℃和5％CO2下孵育24和48小时。24或48小时后，加入1μCi/孔的[3H]-胸苷，并将细胞再孵育18小时。然后使用Harvest系统将细胞收获到96孔玻璃滤器中，并使用自动闪烁计数器测量[3H]-胸苷摄取。每个实验在三个不同的时间一式三份进行;结果表示为24和48小时时的每分钟计数（cpm）±SD[2]。
2）动物实验
小鼠[2]-六至八周龄的SCID小鼠用于此目的。在第0天，所有动物通过尾静脉注射接受1×106个Raji细胞。在肿瘤移植72小时后，将动物分成七组。第一组（A组）作为对照，不接受任何治疗。B组和C组由用i-p给予CC-5013（0.5mg/kg）或泊马度胺（0.5mg/kg）治疗的动物组成。在天+3，+4，+8，+9，+13，+14，+18和+19。组D和E用利妥昔单抗或曲妥珠单抗（同种型对照）单一疗法治疗，通过尾静脉注射以10mg/kg在第++，+10，+15和+20天给予。
最后，F组和G组由用利妥昔单抗联合CC-5013（E组）或泊马度胺（G组）治疗的动物组成。i.p.给IMiDs在每剂Rituximab之前连续两天。治疗结束后，观察动物90天。该研究的终点是生存，定义为发生肢体麻痹的时间。通过颈椎脱位处死达到终点或在观察3个月后存活的动物。对所有器官（肝，肺和脑）进行病理检查以检测任何残留的疾病。在三个不同的场合重复实验。
大鼠[4]-使用总共3只雄性CD-IGS大鼠。泊马度胺通过胃插管以0.5mg/kg（5mL/kg）在0.5％羧甲基纤维素/0.25%吐温80悬浮液制剂中作为单次PO给药施用。将微透析液收集在冷却馏分收集器中，在给药后以25分钟的间隔设定在4℃下10小时。为了计算AUC，将每个样品的校正浓度乘以收集样品的间隔;在这种情况下25分钟，除以每小时60分钟。这些值的总和表示在指定时间范围内的总AUC值。为了生成图，每个时间点的浓度绘制在每个收集间隔的中点。在指定的时间点收集微透析液，并在12小时内使用LC-MS/MS测定法分析泊马度胺浓度。
3）激酶实验
抑制TNF-α合成：在脂多糖（LPS）刺激的PBMC中测量TNF-α抑制活性。在加入LPS（1μg/mL）前1小时将泊马度胺加入人PBMC中，并继续培养18-20小时。然后收获上清液，通过ELISA测定上清液中TNF-α的浓度。通过非线性回归分析计算抑制TNF产生50％的泊马度胺浓度（IC50）。除了将肝素化的新鲜人全血直接接种到微量滴定板中之外，以与PBMC测定类似的方式进行人全血TNF抑制测定。
今天介绍了泊马度胺的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，泊马度胺Pomalidomide是一种抗血管生成剂和免疫调节剂。泊马度胺在LPS刺激的人PBMC中抑制TNF-α释放，IC50为13nM。它的靶点活性是TNF-α,13nM。
您可能想了解泊马度胺的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/19171-19-8_894807.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Zhu YX, et al. Molecular mechanism of action of the immune-modulatory drugs, thalidomide, lenalidomide and pomalidomide in multiple myeloma. Leuk Lymphoma. 2013 Apr;54(4):683-7.
[2]. Hernandez-Ilizaliturri FJ1, et al. Immunomodulatory drug CC-5013 or CC-4047 and rituximab enhance antitumor activity in a severe combined immunodeficient mouse lymphoma model. Clin Cancer Res. 2005 Aug 15;11(16):5984-92.
[3]. Schafer PH, et al. Enhancement of cytokine production and AP-1 tranional activity in T cells by thalidomide-related immunomodulatory drugs. J Pharmacol Exp Ther. 2003 Jun;305(3):1222-32.
[4]. Li Z, et al. Pomalidomide shows significant therapeutic activity against CNS lymphoma with a major impact on the tumor microenvironment in murine models. PLoS One. 2013 Aug 5;8(8):e71754.
[5]. Liu D, et al. Tumour necrosis factor-α inhibits hepatic lipid deposition through GSK-3β/β-catenin signaling in juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.). Gen Comp Endocrinol. 2016 Mar 1;228:1-8.
首先我们介绍泊马度胺的生物活性：
1）体外活性
泊马度胺也抑制全血TNF-α，IC50为25nM[1]。与媒介物处理的对照相比，淋巴瘤细胞暴露于泊马度胺（CC-4047）导致细胞增殖减少40％。泊马度胺抑制Raji细胞DNA合成的40％（P=0.036）[2]。在CD4+和CD8+细胞中，泊马度胺（CC-4047）是最有效的IL-2升降机，其次是CC-6032和CC-5013。泊马度胺在提高IL-2，IL-5和IL-10方面明显比CC-5013更有效，在提高IFN-γ方面比CC-5013更有效[3]。
2）体内活性
在mAb治疗前连续两天施用泊马度胺（CC-4047）增强了利妥昔单抗的抗肿瘤活性，并使携带淋巴瘤的小鼠的中位存活率加倍。统计学上，在利妥昔单抗与泊马度胺+利妥昔单抗治疗的动物之间观察到显着差异。使用泊马度胺和利妥昔单抗治疗的动物的中位生存时间比使用利妥昔单抗单药治疗的动物更长（中位生存期，74天;95％CI，70-78）（中位生存期，38天;95％CI，26-50;log-试验，P=0.002）。
如流式细胞术分析所示，在携带淋巴瘤的SCID小鼠中[2]，连续两天施用CC-5013或泊马度胺导致循环NK细胞数量的显着增加。向大鼠施用50mg/kgPO的泊马度胺（POM）后，血液中未结合的浓度在4.6±2.4小时达到1100±82ng/mL的Cmax值，伴随的AUC（0-10）值为6800±2000ng•hr/mL。然而，大脑中未结合的POM在4.1±1.5小时时的Cmax值为430±63ng/mL，AUC（0-10）值为2700±740ng•hr/mL，给出未结合的AUC脑与AUC血液比率0.39±0.03。这些值与优秀的血脑屏障穿透一致。在该研究中获得的结果与在对小鼠口服给药后观察全脑POM含量的同时研究中观察到的结果一致[4]。
我们已经了解了泊马度胺的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
将淋巴瘤细胞系置于96孔板（每孔1×105个细胞）中并暴露于升高浓度的CC-5013，泊马度胺（2.5,5,10,20和40μg/mL）或载体对照单一试剂或与利妥昔单抗或曲妥珠单抗（同种型）组合，最终抗体浓度为10μg/mL。用10％RPMI将终浓度调节至200μL。将细胞系在37℃和5％CO2下孵育24和48小时。24或48小时后，加入1μCi/孔的[3H]-胸苷，并将细胞再孵育18小时。然后使用Harvest系统将细胞收获到96孔玻璃滤器中，并使用自动闪烁计数器测量[3H]-胸苷摄取。每个实验在三个不同的时间一式三份进行;结果表示为24和48小时时的每分钟计数（cpm）±SD[2]。
2）动物实验
小鼠[2]-六至八周龄的SCID小鼠用于此目的。在第0天，所有动物通过尾静脉注射接受1×106个Raji细胞。在肿瘤移植72小时后，将动物分成七组。第一组（A组）作为对照，不接受任何治疗。B组和C组由用i-p给予CC-5013（0.5mg/kg）或泊马度胺（0.5mg/kg）治疗的动物组成。在天+3，+4，+8，+9，+13，+14，+18和+19。组D和E用利妥昔单抗或曲妥珠单抗（同种型对照）单一疗法治疗，通过尾静脉注射以10mg/kg在第++，+10，+15和+20天给予。
最后，F组和G组由用利妥昔单抗联合CC-5013（E组）或泊马度胺（G组）治疗的动物组成。i.p.给IMiDs在每剂Rituximab之前连续两天。治疗结束后，观察动物90天。该研究的终点是生存，定义为发生肢体麻痹的时间。通过颈椎脱位处死达到终点或在观察3个月后存活的动物。对所有器官（肝，肺和脑）进行病理检查以检测任何残留的疾病。在三个不同的场合重复实验。
大鼠[4]-使用总共3只雄性CD-IGS大鼠。泊马度胺通过胃插管以0.5mg/kg（5mL/kg）在0.5％羧甲基纤维素/0.25%吐温80悬浮液制剂中作为单次PO给药施用。将微透析液收集在冷却馏分收集器中，在给药后以25分钟的间隔设定在4℃下10小时。为了计算AUC，将每个样品的校正浓度乘以收集样品的间隔;在这种情况下25分钟，除以每小时60分钟。这些值的总和表示在指定时间范围内的总AUC值。为了生成图，每个时间点的浓度绘制在每个收集间隔的中点。在指定的时间点收集微透析液，并在12小时内使用LC-MS/MS测定法分析泊马度胺浓度。
3）激酶实验
抑制TNF-α合成：在脂多糖（LPS）刺激的PBMC中测量TNF-α抑制活性。在加入LPS（1μg/mL）前1小时将泊马度胺加入人PBMC中，并继续培养18-20小时。然后收获上清液，通过ELISA测定上清液中TNF-α的浓度。通过非线性回归分析计算抑制TNF产生50％的泊马度胺浓度（IC50）。除了将肝素化的新鲜人全血直接接种到微量滴定板中之外，以与PBMC测定类似的方式进行人全血TNF抑制测定。
今天介绍了泊马度胺的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，泊马度胺Pomalidomide是一种抗血管生成剂和免疫调节剂。泊马度胺在LPS刺激的人PBMC中抑制TNF-α释放，IC50为13nM。它的靶点活性是TNF-α,13nM。
您可能想了解泊马度胺的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/19171-19-8_894807.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Zhu YX, et al. Molecular mechanism of action of the immune-modulatory drugs, thalidomide, lenalidomide and pomalidomide in multiple myeloma. Leuk Lymphoma. 2013 Apr;54(4):683-7.
[2]. Hernandez-Ilizaliturri FJ1, et al. Immunomodulatory drug CC-5013 or CC-4047 and rituximab enhance antitumor activity in a severe combined immunodeficient mouse lymphoma model. Clin Cancer Res. 2005 Aug 15;11(16):5984-92.
[3]. Schafer PH, et al. Enhancement of cytokine production and AP-1 tranional activity in T cells by thalidomide-related immunomodulatory drugs. J Pharmacol Exp Ther. 2003 Jun;305(3):1222-32.
[4]. Li Z, et al. Pomalidomide shows significant therapeutic activity against CNS lymphoma with a major impact on the tumor microenvironment in murine models. PLoS One. 2013 Aug 5;8(8):e71754.
[5]. Liu D, et al. Tumour necrosis factor-α inhibits hepatic lipid deposition through GSK-3β/β-catenin signaling in juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.). Gen Comp Endocrinol. 2016 Mar 1;228:1-8.
相关化合物：泊马度胺