普仑司特的作用 - 生物活性 - 靶点活性
发布时间：2018-11-23 19:50:02 编辑作者：活性达人
图片：普仑司特结构式
普仑司特，英文名Pranlukast，CAS号103177-37-3，它是半胱氨酰白三烯受体-1拮抗剂，通过对意外或无意中遇到的过敏原的过敏反应来拮抗或减轻主要在哮喘患者中引起的支气管痉挛。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍普仑司特的生物活性：
1）体外活性
在放射性配体结合试验中，普仑司特（ONO-1078）抑制[3H]LTE4，[3H]LTD4和[3H]LTC4与肺膜的结合，Kis分别为0.63±0.11,0.99±0.19和5640±680nM。普仑司特对[3H]LTD4结合的拮抗作用具有竞争性。在功能实验中，普仑司特显示出针对LTC4和LTD4诱导的豚鼠气管和肺实质条带收缩的竞争性拮抗作用，pA2范围为7.70至10.71。5 mM普仑司特或Zafirlukast在致敏豚鼠气管中，明显抑制卵清蛋白诱导的分泌分别达70%和65%。普仑司特或Zafirlukast以浓度依赖的方式明显抑制10 mM LTD4诱发的35SO4输出，10 mM 普仑司特最大的抑制为83%，10 mM 扎鲁司特最大的抑制为78%，IC50值分别为0.3 mM和0.6 mM。
在存在LTC4生物转化为LTD4的抑制剂的情况下，普仑司特还拮抗LTC4诱导的豚鼠气管收缩（pA2=7.78）。普仑司特显着逆转LTD4诱导的长期收缩而不影响KCl-和BaCl2诱导的豚鼠气管收缩[1]。通过用CysLT1受体拮抗剂普仑司特（10μM）预处理抑制氧-葡萄糖剥夺（OGD）诱导的CysLT1受体的核转位。
普仑司特保护内皮细胞免受缺血样损伤。还评估了CysLT1受体拮抗剂普仑司特和5-脂氧合酶抑制剂Zileuton对易位的影响。结果显示，普仑司特但不是Zileuton，在OGD后6小时抑制CysLT1受体的易位[2]。
普仑司特在1.3％DMSO-分化的U-937和Jurkat细胞中抑制NF-κB的活化，抑制率分别为40％与30％；和MK-571剂量依赖性抑制NF-κB的活化。普仑司特和MK-571抑制脂多糖诱导PBMC中的IL-6产生分别约65％和15％。普仑司特抑制phorbol 12-myristate 13-acetate诱导的NF-κB活化。它在NCI-H292细胞中，通过逆转录 - 聚合酶链反应明显抑制脂多糖诱导MUC2 mRNA表达。普仑司特也抑制HM3-MUC2细胞脂多糖诱导MUC2基因的表达。
2）体内活性
腹膜内注射角叉菜胶（CAR，每只小鼠5mg）。在静脉内注射LPS（每只小鼠50只，每只小鼠）之前24小时。分别注射各种剂量的普仑司特（ONO-1078;40,20和10mmol/kg），AA-861（20,10和5mmol/kg），吲哚美辛（40mmolkg）和对照。在用50μg/L的LPS攻击前30分钟进入小鼠体内。
对于AA-861，在10％DMSO中的最大可溶剂量为0.6mmol/mL，对于普仑司特，在10％乙醇中的最大可溶剂量为1.2mmol/mL。这些溶液用作治疗的最大剂量。相对于对照小鼠，小鼠的AA-861-普仑司特治疗小鼠的死亡率显着降低。用CAR预处理（5mgi.p.）使小鼠对LPS的作用更敏感。
尽管在LPS（每只小鼠50只，每只小鼠）给药后72小时，用每种溶剂处理的小鼠的存活率是20％，但是皮下注射。用AA-861（20mmol/kg）或普仑司特（40mmol/kg）治疗可显着提高LPS给药后的存活率（AA-861，P<0.001;Pranlukast，P<0.01）[3]。普仑司特在小鼠的缺血性半球的皮质和海马CA1区中明显减少损伤体积，并提高神经元密度。普仑司特在小鼠的缺血性半球中，还明显地使疤痕壁变薄。
我们已经了解了普仑司特的生物活性，接下来如何实验呢？一般来说，有如下的两种方法：
1）细胞实验
EA.hy926细胞在Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）中培养，补充有10％热灭活的胎牛血清，青霉素（100U/mL）和链霉素（100mg/mL）。在接种细胞后24小时进行实验。执行OGD。简而言之，原始介质被移除;用无葡萄糖的Earle平衡盐溶液（EBSS）洗涤细胞两次，并置于新鲜的无葡萄糖EBSS中。然后将培养物置于含有5％CO2和95％N2的培养箱中，在37℃下培养2至8小时。在正常条件下将对照培养物维持在含葡萄糖的EBSS中。在OGD暴露前30分钟将10μM普仑司特，10μMZileuton，5-LOX抑制剂或10μM吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）加入培养物中并在OGD期间维持[2]。
2）动物实验
小鼠[3]-使用雄性ddY小鼠。使用的所有小鼠都是7至8周龄。在小鼠中诱导内毒素休克。简言之，在LPS攻击前24小时腹膜内（i.p.）注射CAR（5mg，在0.5mL生理盐水中）作为引发剂。将LPS（50μl，在0.5mL生理盐水中）静脉内注射到尾静脉中作为诱导剂。在LPS激发前30分钟，将指定剂量的AA-861，普仑司特（40,20和10mmol/kg），盐水，DMSO或乙醇以1mL的体积皮下（sc）给予小鼠背部。两种药物均皮下注射，因为CARi.p.预处理引起腹膜炎。为了检查内源性TNF在CAR预处理小鼠中的作用，在LPS攻击之前静脉内（i.v.）注射2×105U兔抗TNF-α抗体或0.2mL兔的正常血清[3]。
今天介绍了普仑司特的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，普鲁司特Pranlukast是一种高效的竞争性的选择性leukotriene拮抗剂。Pranlukast抑制[3H]LTE4，[3H]LTD4和[3H]LTC4与肺膜结合，Ki分别为0.63±0.11，0.99±0.19和5640±680nM。它的靶点活性是CysLTR,Eosinophilcationicprotein,IL-5,Mucin-2,NF-κB,TNF-α。
您可能想了解普仑司特的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/103177-37-3_122968.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Obata T, et al. In vitro antagonism of ONO-1078, a newly developed anti-asthma agent, against peptide leukotrienes in isolated guinea pig tissues. Jpn J Pharmacol. 1992 Nov;60(3):227-37.
[2]. Fang SH, et al. Nuclear translocation of cysteinyl leukotriene receptor 1 is involved in oxygen-glucose deprivation-induced damage to endothelial cells. Acta Pharmacol Sin. 2012 Dec;33(12):1511-7.
[3]. Ogata M, et al. Protective effects of a leukotriene inhibitor and a leukotriene antagonist on endotoxin-induced mortality in carrageenan-pretreated mice. Infect Immun. 1992 Jun;60(6):2432-7.
首先我们介绍普仑司特的生物活性：
1）体外活性
在放射性配体结合试验中，普仑司特（ONO-1078）抑制[3H]LTE4，[3H]LTD4和[3H]LTC4与肺膜的结合，Kis分别为0.63±0.11,0.99±0.19和5640±680nM。普仑司特对[3H]LTD4结合的拮抗作用具有竞争性。在功能实验中，普仑司特显示出针对LTC4和LTD4诱导的豚鼠气管和肺实质条带收缩的竞争性拮抗作用，pA2范围为7.70至10.71。5 mM普仑司特或Zafirlukast在致敏豚鼠气管中，明显抑制卵清蛋白诱导的分泌分别达70%和65%。普仑司特或Zafirlukast以浓度依赖的方式明显抑制10 mM LTD4诱发的35SO4输出，10 mM 普仑司特最大的抑制为83%，10 mM 扎鲁司特最大的抑制为78%，IC50值分别为0.3 mM和0.6 mM。
在存在LTC4生物转化为LTD4的抑制剂的情况下，普仑司特还拮抗LTC4诱导的豚鼠气管收缩（pA2=7.78）。普仑司特显着逆转LTD4诱导的长期收缩而不影响KCl-和BaCl2诱导的豚鼠气管收缩[1]。通过用CysLT1受体拮抗剂普仑司特（10μM）预处理抑制氧-葡萄糖剥夺（OGD）诱导的CysLT1受体的核转位。
普仑司特保护内皮细胞免受缺血样损伤。还评估了CysLT1受体拮抗剂普仑司特和5-脂氧合酶抑制剂Zileuton对易位的影响。结果显示，普仑司特但不是Zileuton，在OGD后6小时抑制CysLT1受体的易位[2]。
普仑司特在1.3％DMSO-分化的U-937和Jurkat细胞中抑制NF-κB的活化，抑制率分别为40％与30％；和MK-571剂量依赖性抑制NF-κB的活化。普仑司特和MK-571抑制脂多糖诱导PBMC中的IL-6产生分别约65％和15％。普仑司特抑制phorbol 12-myristate 13-acetate诱导的NF-κB活化。它在NCI-H292细胞中，通过逆转录 - 聚合酶链反应明显抑制脂多糖诱导MUC2 mRNA表达。普仑司特也抑制HM3-MUC2细胞脂多糖诱导MUC2基因的表达。
2）体内活性
腹膜内注射角叉菜胶（CAR，每只小鼠5mg）。在静脉内注射LPS（每只小鼠50只，每只小鼠）之前24小时。分别注射各种剂量的普仑司特（ONO-1078;40,20和10mmol/kg），AA-861（20,10和5mmol/kg），吲哚美辛（40mmolkg）和对照。在用50μg/L的LPS攻击前30分钟进入小鼠体内。
对于AA-861，在10％DMSO中的最大可溶剂量为0.6mmol/mL，对于普仑司特，在10％乙醇中的最大可溶剂量为1.2mmol/mL。这些溶液用作治疗的最大剂量。相对于对照小鼠，小鼠的AA-861-普仑司特治疗小鼠的死亡率显着降低。用CAR预处理（5mgi.p.）使小鼠对LPS的作用更敏感。
尽管在LPS（每只小鼠50只，每只小鼠）给药后72小时，用每种溶剂处理的小鼠的存活率是20％，但是皮下注射。用AA-861（20mmol/kg）或普仑司特（40mmol/kg）治疗可显着提高LPS给药后的存活率（AA-861，P<0.001;Pranlukast，P<0.01）[3]。普仑司特在小鼠的缺血性半球的皮质和海马CA1区中明显减少损伤体积，并提高神经元密度。普仑司特在小鼠的缺血性半球中，还明显地使疤痕壁变薄。
我们已经了解了普仑司特的生物活性，接下来如何实验呢？一般来说，有如下的两种方法：
1）细胞实验
EA.hy926细胞在Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）中培养，补充有10％热灭活的胎牛血清，青霉素（100U/mL）和链霉素（100mg/mL）。在接种细胞后24小时进行实验。执行OGD。简而言之，原始介质被移除;用无葡萄糖的Earle平衡盐溶液（EBSS）洗涤细胞两次，并置于新鲜的无葡萄糖EBSS中。然后将培养物置于含有5％CO2和95％N2的培养箱中，在37℃下培养2至8小时。在正常条件下将对照培养物维持在含葡萄糖的EBSS中。在OGD暴露前30分钟将10μM普仑司特，10μMZileuton，5-LOX抑制剂或10μM吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）加入培养物中并在OGD期间维持[2]。
2）动物实验
小鼠[3]-使用雄性ddY小鼠。使用的所有小鼠都是7至8周龄。在小鼠中诱导内毒素休克。简言之，在LPS攻击前24小时腹膜内（i.p.）注射CAR（5mg，在0.5mL生理盐水中）作为引发剂。将LPS（50μl，在0.5mL生理盐水中）静脉内注射到尾静脉中作为诱导剂。在LPS激发前30分钟，将指定剂量的AA-861，普仑司特（40,20和10mmol/kg），盐水，DMSO或乙醇以1mL的体积皮下（sc）给予小鼠背部。两种药物均皮下注射，因为CARi.p.预处理引起腹膜炎。为了检查内源性TNF在CAR预处理小鼠中的作用，在LPS攻击之前静脉内（i.v.）注射2×105U兔抗TNF-α抗体或0.2mL兔的正常血清[3]。
今天介绍了普仑司特的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，普鲁司特Pranlukast是一种高效的竞争性的选择性leukotriene拮抗剂。Pranlukast抑制[3H]LTE4，[3H]LTD4和[3H]LTC4与肺膜结合，Ki分别为0.63±0.11，0.99±0.19和5640±680nM。它的靶点活性是CysLTR,Eosinophilcationicprotein,IL-5,Mucin-2,NF-κB,TNF-α。
您可能想了解普仑司特的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/103177-37-3_122968.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Obata T, et al. In vitro antagonism of ONO-1078, a newly developed anti-asthma agent, against peptide leukotrienes in isolated guinea pig tissues. Jpn J Pharmacol. 1992 Nov;60(3):227-37.
[2]. Fang SH, et al. Nuclear translocation of cysteinyl leukotriene receptor 1 is involved in oxygen-glucose deprivation-induced damage to endothelial cells. Acta Pharmacol Sin. 2012 Dec;33(12):1511-7.
[3]. Ogata M, et al. Protective effects of a leukotriene inhibitor and a leukotriene antagonist on endotoxin-induced mortality in carrageenan-pretreated mice. Infect Immun. 1992 Jun;60(6):2432-7.
相关化合物：普仑司特