| 描述 |
Pevonedistat hydrochloride (MLN4924 hydrochloride) 是一种有效,选择性的 NEDD8 活化酶 (NEDD8-activating enzyme) 抑制剂,IC50 为 4.7 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 4.7 nM (NAE)
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| 体外研究 |
Pevonedistat(MLN4924)是NAE的有效抑制剂(半数最大抑制浓度(IC50 =0.004μM),相对于密切相关的酶UAE,SAE,UBA6和ATG7具有选择性(IC50 = 1.5,8.2,1.8和> 10)分别为μM.Pevonedistat(MLN4924)处理抑制培养的HCT-116细胞中的总体蛋白质周转。用Pevonedistat(MLN4924)处理HCT-116细胞24小时导致Ubc12-NEDD8硫酯和NEDD8-的剂量依赖性降低。 cullin结合物,IC50 <0.1μM,导致已知CRL底物CDT1,p27和NRF2(也称为NFE2L2)丰度的相互增加,但非CRL底物[1] .Pevonedistat诱导CLL细胞凋亡Pevonedistat促进Bcl和Noxa在CLL细胞中的诱导,导致Bcl-2家族成员再次平衡至仅促凋亡的BH3蛋白[2] .Pivonedistat(MLN4924)迅速抑制cullin 1 neddylation并显着抑制growt h和生存以及在胃癌细胞中以剂量和时间依赖性方式迁移,并通过转录激活E-钙粘蛋白和抑制MMP-9显着抑制迁移[3]。
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| 体内研究 |
Pevonedistat(MLN492410,30或60 mg/kg,sc)导致HCT-116荷瘤小鼠中NRF2和CDT1稳态水平的剂量和时间依赖性增加,并降低正常小鼠中NEDD8-cullin水平小鼠骨髓细胞中所示的组织。以30和60mg/kg的BID方案施用的Pevonedistat(MLN4924)抑制肿瘤生长,T/C值分别为0.36和0.15 [1]。
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| 细胞实验 |
将生长在6孔细胞培养皿中的HCT-116细胞用0.1％DMSO（对照）或Pevonedistat（MLN4924）处理24小时。制备全细胞提取物并通过免疫印迹分析。为了分析E2-UBL硫酯水平，通过非还原性SDS-PAGE分离裂解物，并用针对Ubc12，Ubc9和Ubc10的多克隆抗体进行免疫印迹。对于其他蛋白质的分析，通过还原SDS-PAGE分离裂解物并用如下一抗探测：针对CDT1，p27，孪蛋白，遍在蛋白，securin / PTTG和p53的小鼠单克隆抗体或针对NRF2，Cyclin B1和GADD34的兔多克隆抗体。使用Ac-KEIEIDIEPTDKVERIKERVEE-酰胺和Ac-VKYSS（pS）QPEPRT-酰胺分别作为免疫原产生针对NEDD8和磷酸化CHK1（Ser 317）的兔单克隆抗体。针对pH3的抗体，切割的PARP和切割的半胱天冬酶3来自Cell Signaling Technologies。适当地使用针对兔IgG或小鼠IgG的二级HRP标记的抗体。用ECL试剂开发印迹。
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| 动物实验 |
雌性无胸腺NCR小鼠用于所有体内研究。在右侧腹侧皮下接种2×106个HCT-116细胞（或30-40mg H522肿瘤片段），用卡尺测量监测肿瘤生长。当平均肿瘤体积达到约200mm 3时，动物用载体（10％环糊精）或Pevonedistat（MLN4924）皮下给药。在治疗的最后一天计算肿瘤生长抑制（T / C）。
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| 参考文献 |
[1]. Soucy TA, et al. An inhibitor of NEDD8-activating enzyme as a new approach to treat cancer. Nature. 2009 Apr 9;458(7239):732-6. [2]. J. Claire Godbersen, e tal. The Nedd8-Activating Enzyme Inhibitor MLN4924 Thwarts Microenvironment-Driven NF-κB Activation and Induces Apoptosis in Chronic Lymphocytic Leukemia B Cells. [3]. Lan H, et al. Neddylation inhibitor MLN4924 suppresses growth and migration of human gastric cancer cells. Sci Rep. 2016 Apr 11;6:24218.
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